На головну

лабораторні роботи

  1. I Розрахунок витрат для визначення повної собівартості вироби (роботи, послуги), визначення рентабельності его виробництва
  2. I. Загальна характеристика роботи
  3. II. Вихідні дані і порядок виконан курсової роботи
  4. II. Загальні вимоги ДО ВИКОНАННЯ розрахунково-ГРАФІЧНОЇ РОБОТИ
  5. II. Практичні завдання для контрольної роботи
  6. II. Вимоги охорони праці перед качаном роботи
  7. III. Завдання для Самостійної роботи по темі, что вівчається.

Лабораторна робота № 1. Визначення актівності АСТ (аспартатамінотрансферазі) в сіроватці крови по Райтманом и Френкелю

 
 

Принцип методу.В результате переамінування, что відбувається під дією АСТ, утворюється щавелевоуксусная кислота. Щавлевооцетова кислота спонтанно декарбоксилируется в пировиноградную. При додаванні 2,4-дінітрофенілгідразіна в Лужному середовіщі утворюється гідразон піровіноградної кислоти червоно-коричневого кольору, інтенсівність забарвлення которого візначається колориметрически (див. Рівняння).

Хід роботи. Пробірку з 0,25 мл субстратної-буферної суміші нагрівають в термостаті при 37 ° C в течение 5 хв, додаються 0,05 мл Сироватко крови и інкубують 60 хв у термостаті при Цій же температурі.

Додаються 0,25 мл Розчин 2,4-дінітрофенілгідразіна и вітрімують течение 20 хв при кімнатній температурі. Потім додаються ще 2,5 мл NaOH, перемішують и залішають ще на 10 хв при кімнатній температурі.

Вімірюють на фотометрі екстінкцію дослідної проби при довжіні Хвилі 500-560 нм (зелений світлофільтр) в кюветі з товщина шару 10 мм. В якості контрольної проби вікорістовується дістільована вода.

Розрахунок. Проводять за калібрувальнім графіком.

Норма. АСТ - 0,1-0,45 ммоль / ч.л (пірувату на 1 л Сироватко крови за 1 годину інкубації при 37 ° С).

Висновки. Записати отриманий результат и дати его клініко-діагностічну оцінку.

Лабораторна робота № 2.Визначення актівності АЛТ (аланінамінотрансферазі) в сіроватці та плазмі крови ферментативних методом (УФ-області)

Принцип методу. Заснований на сполученні двох ферментативних реакцій (АЛТ и ЛДГ) - трансаминирования и Подальшого NADH-залежного відновленні пірувату, что утворюється в процесі трансамінування.

I етап:

АЛТ

L-ала + a-кетоглутарат ?® піруват + L-глу;

II етап:

ЛДГ

піруват + NADH + H+????® L-лактат + NAD+.

Хід Реакції реєструють по убутку відновленої форми коферменту - NADH + Н+, Що має максимум поглінання при 340 нм.

Хід роботи.Активність АЛТ в сіроватці крови визначаються в 2 етапи.

I етап. У пробірку вносять 1 мл Розчин № 1 (суміш ЛДГ, NADH + Н+буфер-субстрату, пірідоксаль-фосфату) и 0,1 мл Сироватко крови, перемішують и інкубують 5 хв при 37 ° C.

II етап. Вміст пробіркі перелівають в кювету, Попередньо нагріту до 37 ° C, и додаються 0,1 мл Розчин № 2 (a-кетоглутарат).

Вімірюють оптичні щільність при довжіні Хвилі 340 нм, шіріні кювети 10 мм, в інтервалі 3 хв.

Розрахунок. Обчислюють зміну екстінкції за 1 хв (D А / Dt) в мккат / л, а такоже каталітічну концентрацію (Активність АЛТ) за формулою

С = DA /Dt ' 31,75.

Норма.Активність АЛТ Сироватко крови дорівнює 0,15-0,96 мккат / л.

Клініко-діагностічне значення. Визначення актівності АЛТ и АСТ широко вікорістовується в ранньої діференційної діагностики різніх захворювань. Обидвоє ферменти вісокоактівні різніх тканинах. Однако найбільша Активність АЛТ доводитися на печінку, а АСТ - на міокард. У зв'язку з скроню інформатівністю визначення актівності АЛТ вікорістовується для ранньої діагностики хвороби Боткіна (до з'явиться жовтяніці та дерло сімптомів хвороби - нездужання, слабкості и т. Д), А також ее безжовтянічніх форм. Висока Активність ферменту в крови підтрімується Перші 10-15 днів, а потім поступово зніжується. Степень Збільшення актівності АЛТ корелює з тяжкістю хвороби.

АСТ більш спеціфічна для міокарда, тому вікорістовується для ранньої діференційної діагностики інфаркту міокарда. Причем Збільшення актівності відзначається через 24-36 годин и зніжується на 3-7-е добу.

Висновки. Записати отриманий результат и дати его клініко-діагностічну оцінку.

рекомендована література

Основна

1 Матеріал лекцій.

2 Березів Т. Т., Коровкін Б. Ф. Біологічна хімія. М.: Медицина, 1990. С. 354-364; 1998. С. 451-468.

3 Миколаїв А. Я. Біологічна хімія. М.: Вища школа, 1989. С. 323-327, 331-338.

Дополітельная

4 Маррі Р. та ін. Біохімія людини. М.: Світ, 1993. Т. 1 С. 343-355.

5 Пилипович Ю.Б. Основи біохімії. М.: Вища школа, 1993. С. 259-267.

6 Ленинджер А. Основи біохімії. М.: Світ, 1985. Т. 2. С. 653-681.

7 Вроджені и набуті ензімопатії / Под ред. Т. Ташева. М.: Медицина, 1980. С. 120-136.

8 Вілкінсон Д. Принципи та методи діагностичної ензімології. М.: Медицина, 1981. С. 574-586.

 



практична частина | теоретична частина

Матеріал в Цій Книзі:

лабораторні роботи | теоретична частина | теоретична частина | практична частина | заняття 16 | теоретична частина | лабораторні роботи | теоретична частина | практична частина | теоретична частина |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати