На головну

лабораторні роботи

  1. I Розрахунок витрат для визначення повної собівартості вироби (роботи, послуги), визначення рентабельності его виробництва
  2. I. Загальна характеристика роботи
  3. II. Вихідні дані і порядок виконан курсової роботи
  4. II. Загальні вимоги ДО ВИКОНАННЯ розрахунково-ГРАФІЧНОЇ РОБОТИ
  5. II. Практичні завдання для контрольної роботи
  6. II. Вимоги охорони праці перед качаном роботи
  7. III. Завдання для Самостійної роботи по темі, что вівчається.

Лабораторна робота № 1. Кольорові Реакції на Білки
и амінокислоти

Біуретова Реакція.

Принцип методу.У Лужному середовіщі пептідні зв'язку Білка утворюють з іонамі двухвалентной МІДІ комплекс фіолетового кольору (див. Рівняння).

 
 

УВАГА! Дотримуватись ЗАХОДІВ безпеки при роботі з гідроксідом натрію.

Хід роботи.У три пробіркі налівають по 5 крапель розчінів: в 1-ю - яєчного Білка, до 2-ї - желатину, в 3-ю - міозіну. У шкірного пробірку додаються по 5 крапель 10% -го розчин гідроксиду натрію и по 1 краплі 1% -го розчин мідного купоросу. У всех пробірках спостерігають стійке синьо-фіолетове забарвлення.

Висновки за результатами роботи.

Нінгідрінова Реакція.

Принцип методу.Заснований на освіту димера нингидрина и азоту аміногрупі синьо-фіолетового кольору (комплекс Руемана - см. Рівняння).

Хід роботи.До 5 крапель розчин Білка Додати 5 крапель розчин нингидрина и прокип'ятити 1-2 хв. З'являється синьо-фіолетове забарвлення.

 
 

Висновки за результатами роботи.

Ксантопротеиновая Реакція (Мульдера).

Принцип методу.Заснований на освіту нітросполук ароматичний и гетероциклічних амінокіслот, забарвленіх в Яскрава-жовтий колір (див. Рівняння).

УВАГА! Дотримуватись ЗАХОДІВ безпеки при роботі з концентрованою азотною кислотою.

 
 

Хід роботи.У три пробіркі налівають по 5 крапель розчінів: в 1-ю - яєчного Білка, до 2-ї - желатину, в 3-ю - міозіну. У шкірного пробірку додаються по 3 краплі концентрованої азотної кислоти и Обережно кип'ятять. У першій пробірці утворюється осад жовтого кольору, а во второй - Слабкий фарбування, т. К. Желатин НЕ містіть ціклічніх амінокіслот. У 3-й пробірці утворюється осад білого кольору, что переходити в жовтий колір. Пробіркі охолоджують и додаються в шкірних по 10-15 крапель 20% -го їдкого натру до Зміни забарвлення розчінів внаслідок Утворення натрієвої СОЛІ дінітротірозіна.

Висновки за результатами роботи.

Реакція на тирозин (Миллона).

Принцип методу.Заснований на освіту облогу ртутної СОЛІ дінітротірозіна Кривава-червоного кольору (див. Рівняння).

 
 

УВАГА! Дотримуватись ЗАХОДІВ безпеки при роботі з реактивом Миллона (містіть Hg и HNO3).

Хід роботи.У три пробіркі налівають по 5 крапель розчінів: в 1-ю - яєчного Білка, до 2-ї - желатину, в 3-ю - міозіну. У шкірного пробірку додаються по 3 краплі реактиву Миллона (розчин ртуті в азотній кіслоті) и Обережно нагрівають. Відзначають зміна кольору в пробірках, что характерізує наявність в зазначену білках тирозину.

Висновки за результатами роботи.

Реакція Фоля (на амінокислоти, що містять слабо зв'язаної сірку).

Принцип методу.Заснований на Лужному гідролізі сульфгідрільніх груп SH Білка з подалі відщепленні сірки у виде сульфіду свинцю (PbS) чорно-бурого кольору (див. Рівняння).

УВАГА! Дотримуватись ЗАХОДІВ безпеки при роботі з реактивом Фоля (містіть NaOH и Na2PbO2).

 
 

Хід роботи.У три пробіркі налівають по 5 крапель розчінів: в 1-ю - яєчного Білка, до 2-ї - желатину, в 3-ю - міозіну. У шкірного пробірку додаються по 5 крапель реактиву Фоля. Потім інтенсівно кип'ятять и дають Постоята 1-2 хв. При цьом в 1-й и в 3-й пробірках утворюється чорний або Бурий облог сульфіду свинцю. Желатин облогу НЕ утворює, т. К. В ньом немає сірковмісних амінокіслот.

Висновки за результатами роботи.

Лабораторна робота № 2.Реакції осадженим білків

Принцип методу.Заснований на денатурації и осадженні білків різнімі факторами.

Осадженим білків при кіп'ятінні.

УВАГА! Дотримуватись ЗАХОДІВ безпеки при роботі з нагріванням пробірок.

Хід роботи.У 5 пробірок налівають по 5 крапель розчин Білка. Першу пробірку нагріті до кіпіння. Рідина мутніє, т. К. Руйнуються водні Оболонки вокруг молекули Білка, и відбувається укрупнення его частінок. Міцелі Білка несуть заряд и утрімуються в підвішеному стані.

У 2-й пробірці нагріті розчин до кіпіння и Додати 2 краплі 1% -го розчин оцтової кислоти до Слабкий підкіслення. При відстоюванні віпадає облог Білка. Частинку Білка втрачають заряд и набліжаються до ізоелектрічної стану.

У 3-ю пробірку Додати 5 крапель оцтової кислоти для сильнокислой Реакції середовища. При кіп'ятінні Рідини облогу НЕ утворюється, оскількі білкові міцелі перезаряджаються и несуть позитивний заряд, что підвіщує їх стійкість.

У 4-ю пробірку налиті 5 крапель розчин оцтової кислоти, 2 краплі насіченого розчин хлористого натрію и нагріті. Віпадає білий пластівчастій облог, т. Е Частки Білка втрачають заряд.

У 5-ю пробірку Додати 2 краплі розчин гідроксиду натрію. При кіп'ятінні облог НЕ утворюється, т. К. В Лужному середовіщі негативний заряд на Частинку Білка збільшується.

Висновки за результатами роботи.

Осадженим білків концентрованімі мінеральними кислотами.

УВАГА! Дотримуватись ЗАХОДІВ безпеки при роботі з концентрованімі азотної та сірчаної кислотами.

Хід роботи.У 2 пробіркі налівають по 10 крапель концентрованіх кислот: азотної та сірчаної. Нахил пробіркі під кутом 45 градусів, Обережно по стінці пробіркі долівають рівний об'єм розчин Білка так, щоб обідві Рідини НЕ змішуваліся. На межі двох рідін утворюється осад у виде невеликого білого кільця. При додаванні надлишком азотної кислоти облог НЕ зникає, а при додаванні сірчаної кислоти облог розчіняється.

Висновки за результатами роботи.

Осадженим білків органічнімі розчинники.

Хід роботи.У 2 пробіркі вносячи по 5 крапель розчин Білка и додаються по 15-20 крапель етилового спирту и ацетону.

Висновки за результатами роботи.

Осадженим білків органічнімі кислотами.

УВАГА! Дотримуватись ЗАХОДІВ безпеки при роботі з тріхлороцтової кислотою.

Хід роботи.У две пробіркі налівають по 5 крапель розчин Білка и додаються по 2 краплі розчин ТХУ (тріхлороцтової кислоти) в одну і 2 краплі сульфосалициловой - в іншу. Стежать за зміною розчінів.

Висновки за результатами роботи.

Лабораторна робота № 3.Поділ альбумінів и глобулінів методом вісолювання (УИРС)

Принцип методу.Заснований на оборотної Реакції осадженим білків з розчінів с помощью високих концентрацій нейтральних солей (NaCl, NH4Cl, MgSO4та ін.).

Хід роботи.До 1 мл нерозведеного яєчного Білка додаються 1 мл насіченого розчин сульфату амонію и перемішують. Вихід напівнасічення розчин сульфату амонію, в якому віпадає облог яєчного глобуліну. Через 5 хв облог відфільтровують, у фільтраті залішається яєчній альбумін. Для вісолювання альбумінів до фільтрату додаються порошок сульфату амонію до полного насічення, т. Е Поки нова Порція порошку залішається нерозчіненої. Віпа облог альбуміну відфільтровують. З фільтратом проробляють біуретову реакцію. Негативна Реакція вказує на ВІДСУТНІСТЬ Білка.

Висновки за результатами роботи.

рекомендована література

Основна

1 Матеріал лекцій.

2 Березів Т. Т., Коровкін Б. Ф. Біологічна хімія. М.: Медицина, 1990. С. 92-102; 1998. С. 114-143.

3 Миколаїв А. Я. Біологічна хімія. М.: Вища школа, 1989. С. 5-92.

Додаткова

4 Маррі Р. та ін. Біохімія людини. М.: Світ, 1993. Т. 1. С. 63-75.

5 Пилипович Ю.Б. Основи біохімії. М.: Вища школа, 1993. С. 93-99.

6 Ленинджер А. Л. Основи біохімії. М.: Світ, 1985. Т. 1. С. 226-302.

7 Тюкавкина Н. А., Бауков Ю. І. Біоорганічна хімія, М.: Медицина, 1991. С. 313-376.

8 Албертс Б. та ін. Молекулярна біологія Клітини. М.: Світ, 1994. Т. 1. С. 113-171.

 



теоретична частина | теоретична частина

Матеріал в Цій Книзі:

заняття 1 | практична частина | лабораторні роботи | лабораторні роботи | теоретична частина | практична частина | теоретична частина | практична частина | лабораторні роботи | теоретична частина |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати