На головну

 Області застосування |  ДОСЛІДЖЕННЯ ЕКСПРЕСІЇ ГЕНОВ МЕТОДОМ мікрочіпів |  МЕТОД СПРЯМОВАНОГО мутагенезу |  ЗАСТОСУВАННЯ РЕГУЛЯТОРНИХ МІКРО-РНК В імунологічні ДОСЛІДЖЕННЯХ |  MiRNA-146 |  MiRNA-155 |  MiRNA-223 - регулятор проліферації і активації нейтрофілів |  Клітини-продуценти цитокінів |  Клітини-мішені |  I. Оцінка клітин-продуцентів. |

Порядок роботи

  1.  I Розрахунок витрат для визначення повної собівартості вироби (роботи, послуги), визначення рентабельності його виробництва
  2.  I. Загальна характеристика роботи
  3.  II. Вихідні дані і порядок виконання курсової роботи
  4.  II. Загальні вимоги ДО ВИКОНАННЯ РОЗРАХУНКОВО-ГРАФІЧНОЇ РОБОТИ
  5.  II. Практичні завдання для контрольної роботи
  6.  II. Вимоги охорони праці перед початком роботи
  7.  III. Завдання для самостійної роботи по темі, що вивчається.

1. Отримують суспензію тимоцитів в концентрації 12 ? 106/ Мл середовища RРМI 1640 року, що містить 10% сироватки ембріонів корів і 2-меркаптоетанол (5 ? 10-5 М).

2. Готують ряд послідовних дворазових розведень досвідчених (біологічні рідини організму) і контрольних зразків. В якості контрольних використовують біологічні рідини, що містять ІЛ-1 або зразки, отримані при інкубації мононуклеарних клітин без ЛПС, і лабораторний стандартний ІЛ-1-містить препарат. У 96-ямкові круглодонні планшети з кожного розведення переносять по 50 мкл в 6 лунок.

3. У три лунки кожного розведення додають по 50 мкл розчиненого в повній середовищі очищеного ФГА (Wellcome) в концентрації 3 мкг / мл, а в інші 3 лунки - по 50 мкл середовища.

 

4. У кожну лунку додають по 50 мкл суспензії тимоцитів і інкубують протягом 48 год при 37 ° С.

6. Перед завершенням культивування в лунки вносять по 50 мкл розчину (1 мкКі / мл) [ '3Н] -тімідіна і інкубують ще 20 год.

7. Для визначення рівня радіоактивності клітини культури переносять на фільтрувальний папір за допомогою автоматичного збирача клітин, фільтри висушують і визначають включення мітки рідинним сцинтиляційних лічильником.

8. Результати виражають у вигляді коефіцієнта стимуляції.

 де mcp - Середнє число імпульсів в 3 лунках.

Якщо тімоціти відповідають на стимуляцію стандартним ІЛ-1, то індекс стимуляції досліджуваного зразка, що перевищує 3, достовірно свідчить про ІЛ-1-активності.

Біоаналіза є єдиним методом для оцінки функціонування цитокина, але даний метод повинен бути доповнений різними видами відповідного контролю на специфічність з використанням моноклональних антитіл. Додавання певних моноклональних антитіл до цитокіну в культуру блокує біологічну активність цитокінів, що доводить: сигналом до проліферації клітинної лінії служить визначається цитокин.

Використання біоаналіза для виявлення інтерферону.Принцип оцінки біологічної активності ІФН заснований на його противірусної дії, яке визначається за ступенем інгібіції розмноження тест-вірусу в культурі клітин.

У роботі можуть бути використані клітини, чутливі до дії ІФН: первинно трипсінізірована клітини-фібробласти ембріонів курей і людини, перещеплюваних клітини диплоїдних фібробластів людини та культура мишачих клітин (L929).

При оцінці противірусної дії ІФН доцільно використовувати віруси з коротким циклом розмноження, високу чутливість до дії ІФН: вірус енцефаломієліту мишей, везикулярного стоматиту миші і ін.

 


 III. Оцінка клітин-мішеней. |  Визначення активності інтерферону
© um.co.ua - учбові матеріали та реферати