Головна |
Робота 3.1. Вивчення особливостей будови і життєдіяльностідрозофіли (Drosophila melanogaster) ПІДГОТОВКА ДО ЗАНЯТТЯ (ВИКОНУЄТЬСЯ лаборант) У лабораторних умовах плодову муху містять в пробірках і колбах на живильному середовищі, приготовленої за певним рецептом. Інкубують при температурі +25оЗ і через 17-20 днів пересаджують на свіже живильне середовище. Головні складові частини живильного середовища - дріжджі і цукор. Крім того, в живильне середовище додають агар-агар для створення щільності, а також вводять і інші компоненти (картопля, родзинки, манну крупу та інші). Важливим критерієм якості середовища є те, що вона не повинна розріджувати і витікати при роботі з мухами, в той же час вона не повинна бути занадто твердою і щільною, щоб личинки в ній могли легко пересуватися. Таблиця 4 - Склад живильного середовища
Для приготування середовища в відведені кількість води вносять наважку агару, дають агару набрякнути протягом 1-2 годин. Потім додають інші компоненти і ставлять на вогонь, помішуючи середу час від часу, щоб не пригоріла. Після закипання середу варять на повільному вогні протягом 1 години, не забуваючи помішувати; далі додають пропионовую кислоту (як консервант) і варять ще 15 хвилин. Остигнула до 50-60оЗ живильне середовище розливають в стерильні пробірки або колбочки так, щоб стовпчик її був не менше 2-2,5 см заввишки, закривають ватними пробками. Розлиту середу залишають при кімнатній температурі; на інший день вона готова до вживання. У побутовому холодильнику живильне середовище може зберігатися протягом декількох днів (довго середу зберігати не можна - вона підсихає і псується). Для пересадки дрозофіли на свіже живильне середовище з колбочки або пробірки, де мешкають лінійні мухи, відбирають по 2-3 самки і по 4-5 самців. Для цього в порожню пробірку з допомогою пластмасової воронки відсипав з колбочки невелика кількість мух. Пробірку закривають ватним корком, зволоженою ефіром, і дають мухам заснути. Через 2-3 хвилини заснули мух витрушують на аркуш білого паперу і швидко за допомогою лупи відбирають потрібну кількість самок і самців. Тих і інших м'яким пензликом переносять в пробірки з живильним середовищем, закривають ватними пробками і маркують пробірки, вказуючи повну характеристику лінії, кількість поколінь, дату пересадки. Наприклад: yellow, F30, 6.10.99 р Для відкладання яєць мухи повинні знаходитися в колбах з живильним середовищем не менше 4-5 діб, після чого їх видаляють. З відкладених яєць розвивається наступне покоління. При утриманні мух в кімнатних умовах з температурою 18-20оЗ пересадку на свіже живильне середовище можна проводити рідше - через 25-30 днів. При плануванні занять з вивчення дрозофіли слід враховувати необхідність значного збільшення кількості мух певних ліній і заздалегідь їх готувати. Безпосередньо перед заняттям (за 2-3-години) частина мух, які будуть використані для вивчення морфологічних особливостей, наркотизують і розподіляють по пробірках без живильного середовища так, щоб кожен студент мав в штативі пробірку з самцями і самками дикого типу і по пробірці з 2 -3 мухами всіх мутантних ліній. Крім того, для вивчення біології дрозофіли необхідно поставити пробірку або колбу зі старою лабораторної культурою, в якій представлені всі стадії розвитку плодової мухи. Для проведення дослідів зі схрещування дрозофіли необхідно пам'ятати, що для отримання достовірних результатів необхідно брати тільки незайманих самок. Для цього надходять у такий спосіб. За 12-15 днів до заняття мух кожної відібраної в досвід лінії пересаджують на свіже живильне середовище, як було описано вище. Пробірки з мухами інкубують при 25оЗ і через 4-6 днів після кладки яєць і появи личинок всіх дорослих особин видаляють. За досвідченими пробірками встановлюють щоденний контроль, щоб не упустити момент початку вильоту мух. Вилетіли через 6-8 годин (але не пізніше) мух відкидають в чисту пробірку з ватним корком, визначають за допомогою лупи в їх складі наявність самок. Якщо такі є, проводять наркотизації, злегка зволоживши ватяну пробку ефіром. Заснули мух відразу ж висипають на аркуш чистого паперу, швидко збирають тільки самок і відкидають в пробірки (або колбочки) з ватяними пробками. Якщо передбачається ставити досліди через якийсь час, самок відсаджують в пробірки з живильним середовищем. Самців поміщають в інші пробірки або знищують, якщо вони не потрібні в досвіді. ВИКОНАННЯ РОБОТИ Помістіть вбитих мух дикого типу на аркуш білого паперу. Розгляньте мух обох статей за допомогою лупи, порівняйте їх. Ви побачите, що самки більші за самців. Одні й другі жовтувато-сірого кольору, мають прямі, довші, ніж тіло, крила, три пари розчленованих ніжок, з боків голови круглі темно-червоні очі, пару коротких розгалужених вусиків вся її голова. На черевці самки чітко видно 5 темних поперечних пігментованих смужок, черевце потовщені і загострена на кінці. На черевці самця проглядаються тільки 3 чорних смужки: 2 тонкі і 1 злита, яка займає весь кінчик закругленого черевця. Візьміть пензликом самку і самця і помістіть їх на предметне скло в краплю води, розгляньте їх під малим збільшенням (об'єктив х9, окуляр х7). При установці світла створіть темнопольного освітлення, переводячи відкидну лінзу в такий стан, коли її оправа частково перекриє світловий пучок. При мікроскопії зверніть увагу на очі дрозофіли, вони мають складну фасеточное будова: складаються ніби з великої кількості маленьких кольорових лінз, з'єднаних воєдино. Знайдіть у самця передні ніжки і розгляньте на першому членику статеві гребінці; переконайтеся, що у самок такі гребінці відсутні. Крила мух мають тонкі жилки і по краях облямовані дуже дрібними волосками. ЗАВДАННЯ.За допомогою лупи розгляньте пробірки з культурами живих мух, в яких є всі стадії розвитку дрозофіли. Знайдіть відкладені яйця, личинок, що плазують в живильному середовищі і по стінках пробірок, лялечок. Розгляньте дорослих мух - самок і самців, їх відмінні риси. Замалюйте самку і самця. Напис над малюнком: Плодова муха Drosophila melanogaster. Живий об'єкт. х8. Окремо намалюйте все стадії розвитку дрозофіли, повинні бути дані назви всіх стадій: яйце, личинка, лялечка, доросла особина. Напис над малюнком: Стадії розвитку дрозофіли. Живий об'єкт. х8. МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ | УДК 574.577 | ВСТУП | ЛАБОРАТОРНИХ РОБІТ | ІНФОРМАЦІЇ У ОЗНАКИ ОРГАНИЗМА | Слизової оболонки порожнини рота людини | Приклади РІШЕННЯ ТИПОВИХ ЗАВДАНЬ | Матеріали, що представляються в звіті з лабораторної роботи | РОБОТА 2.1. Вивчення митотического циклу клітини | рослин | |