На головну

Методика дослідження

  1.  I. Проведення статистичної обробки результатів дослідження
  2.  II. Маркетингові дослідження
  3.  II. Основні вимоги до відбору клінічного матеріалу для бактеріологічного дослідження
  4.  III. Діагностичні дослідження і лікувально-профілактичні обробки свиней в період карантину.
  5.  Quot; ФИЛОСОФСКИЕ ДОСЛІДЖЕННЯ "(" Philosophische Untersuchungen ") - головний твір пізнього періоду творчості Вітгенштейна.
  6.  VII. ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-психологічні методи дослідження МИСЛЕННЯ І МОВИ
  7.  VIII. Методи дослідження системи навчання та розвитку як наукова і конструктивна проблема

Необхідні реактиви і матеріали: КН 42 ОРО 44 0, Na 42 ОРО 44 0, NaCI, глюкоза, нітросинім тетразолієм, гепарин, метиловий спирт, 1% водний розчин метиленового зеленого (в разі забруднення синьої фарби необхідно промивання хлороформом через ділильну воронку), микропипетки, предметні скельця, мікроскоп з иммерсией.

Приготування розчину:

А. 1% 15 М фосфатного буфера з рН 7,2 з додаванням 0,2% розчину глюкози і 0,6% розчину натрію хлориду (до 25 мл 1/15 М КН 42 ОРО 44 0 додають 36 мл 1/15 М розчину Na 42 ОНРО 44 0; на 61 4 0 мл буфера потрібно 120 мг глюкози і 370 4 Омг NaCI).

Б. 0,1% нітросинім тетразолієм у фізіологічному розчині натрію хлориду. Для отримання барвника необхідні тривалий перемішування і підігрівання в гарячій воді.

Розчини А і Б фільтрують через паперові фільтри і зберігають в холодильнику при температурі 10 ° С протягом 2-4 тижнів. Безпосередньо перед постановкою тесту змішують рівні кількості розчинів А і Б, суміш нагрівають до 30 - 37 ° С. Кров з пальця хворого беруть піпеткою, промитої гепарином. У центрифужной або пластикової пробірці змішують по 0,1 мл гепаринизированной крові і підігрітою суміші. Інкубація 25 хв в термостаті при 37 ° С, потім 10 хв при кімнатній температурі. З верхнього шару клітинного осаду готують мазки, висушують їх на повітрі 3-5 хв, фіксують метиловим спиртом, потім фарбують метиленовим зеленим протягом 10 хв. Препарати переглядають під мікроскопом з иммерсией.

Постановка стимульованого НСТ-тесту. Гепаринизированную кров попередньо інкубують 25 хв при 37 ° С зі стимулятором (наприклад, 2-мільярдної суспензією стафілокока - штам 209, надосадочной рідиною, що містить лімфокіни та ін.) В рівних обсягах. Потім проводять вищеописаний тест.

Облік результатів: в клініко-лабораторній практиці при постановці тесту відновлення нітросинім тетразолия найбільш широке поширення отримав цитохимический облік результатів, заснований на мікроскопічному визначенні процентного вмісту нейтрофілів з гранулами темно-синього кольору формазану в цитоплазмі. Зазвичай аналізу піддають 100 - 200 сегментоядерних нейтрофілів. Показник індукованого варіанти реакції обчислюють як різницю процентного вмісту поглинув і відновили тетразолієм клітин після впливу фактора стимуляції в порівнянні з даними, отриманими до стимуляції.

Для кількісної оцінки активності тесту за ступенем активності реакції все клітини ділять на 4 групи. До нульової групи відносять нейтрофіли без гранул, в першу групу включають клітини з одиничними гранулами або ті клітини, в яких площа забарвлення формазаном займає до 25 - 30% цитоплазми (1 ступінь активності), до другої групи нейтрофіли, цитоплазма яких на 30 - 70% зайнята гранулами формазану (II ступінь активності); в третю - нейтрофіли, до 100% заповнені гранулами незалежно від того, контролювалися ядра чи ні (Ш ступінь активності). Визначають число клітин, що належать в залежності від активності ферменту до кожного з типів. Це число множать на номер (фактор) типу. Сума отриманих творів представляє показник реакції. Таким чином, показник реакції відновлення нітросинім тетразолия можна розрахувати за формулою:

Показник НСТ-тесту = 1 а + 26 + Зс,

де а, б, с - кількість клітин відповідно нульового, 1, 2, 3 типів.




 аутоімунних захворювань |  система цитокінів |  інтерлейкіни |  інтерферони |  Фактори некрозу пухлини |  фактори зростання |  Методи визначення цитокінів |  система комплементу |  Методи визначення активності комплементу |  Визначення компонентів комплементу |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати