Головна

Глюкозооксидазний метод.

  1.  Біблійна археологія як наука. Предмет і метод.
  2.  Гексокіназну метод.
  3.  Імпульсний метод.
  4.  Імпульсний луна-метод.
  5.  Метод. Метод карт (діаграма) Вейча.
  6.  Метод. метод Квайна

Сьогодні найбільшого поширення набули методи, засновані на використанні ферменту - глюкозооксидази. В основі методу лежить наступна реакція:

Глюкозооксидаза каталізує перенесення двох водневих атомів з першого вуглецевого атома глюкози на кисень, розчинений в рідкому реагенте. При цьому в ході реакції утворюється в еквімолярних кількостях перекис водню. Тобто концентрація утворилася перекису водню точно дорівнює визначається концентрації глюкози. Отже, використання глюкозооксидазної реакції, трансформувало завдання визначення концентрації глюкози в задачу визначення концентрації перекису водню, яка, як буде показано нижче, значно простіше першої. І тут є кілька способів, широко використовуваних сьогодні в лабораторній практиці (див. Схему).

Серед перерахованих вище способів реєстрації найбільшого поширення набув фотометричний біохімічний метод, В якому молекули перекису водню під дією ферменту пероксидази розщеплюються з утворенням активної форми кисню - супероксид аніон-радикала - Про2-, Який в свою чергу окисляє хромоген, що призводить до значної зміни спектра поглинання хромогену.

Велика популярність даного методу визначення глюкози пояснюється його високою специфічністю і простотою виконання. Метод можна реалізувати як із застосуванням звичайної фотометра, так і за допомогою автоматичних біохімічних автоаналізаторів.

Глюкозооксидазний метод визнаний сьогодні одним з найбільш точних кількісних методів визначення глюкози. Як біологічного матеріалу використовується як сироватка крові, так і цільна кров. При роботі з останньою слід враховувати той факт, що під час взяття капілярної крові частка сироватки (плазми) залежить від величини гематокриту, що може негативно відбитися на точності результату. Тому при визначенні глюкози вищеописаним методом переважно використовувати сироватку крові пацієнта.

Поряд з методом фотометрірованія по кінцевій точці, кілька років тому з'явилися набори, в яких реалізований кінетичний метод фотометрірованія. Суть методу полягає в тому, що при певному співвідношенні активностей глюкозооксидази і пероксидази, швидкість освіти пофарбованого з'єднання деякий час після внесення проби в робочий розчин буде пропорційна концентрації глюкози в пробі. Перевага такого методу полягає в тому, що результат не залежить від наявності в пробі інших з'єднань, оскільки поглинання останніх стабільно в часі. Цей метод вимагає застосування кінетичного фотометра, напівавтоматичних аналізаторів або автоматичних біохімічних аналізаторів. Вимірювання концентрації глюкози з цільної крові зручно виконувати за допомогою приладів, робота яких заснована на АМПЕРОМЕТРИЧНИЙ принципі вимірювання, за допомогою спеціальних ферментних датчиків. Перекис водню є вкрай нестабільним хімічною сполукою, і вона може служити джерелом заряджених частинок. Саме це і використовується в ферментних датчиках мембранного типу або електрохімічних елементах портативних глюкометрів.

У висновку слід згадати і про недоліки глюкозооксидазного методу. Утвориться перекис водню і супероксид аніон-радикал можуть окисляти не тільки хромоген, а й інші речовини, присутні в біологічної рідини: аскорбінову кислоту, сечову кислоту, білірубін. При цьому, відповідно, частка перекису, яка бере участь в окисленні хромогену, знижується, що призводить до заниження результату по глюкозі. Цей метод лине, як правило, до 20-30 ммоль / л глюкози.




 типи протеінограмма |  В сироватки крові |  Тести на БОФ використовувані в клінічній практиці. |  САМОСТІЙНА РОБОТА СТУДЕНТІВ |  Альфа-амілаза при панкреатиті |  САМОСТІЙНА РОБОТА СТУДЕНТІВ |  Етіологічна класифікація цукрового діабету (ВООЗ, 1999). |  Критерії діагностики ЦД та інших категорій гіперглікемії (ВООЗ, 1999) |  Діагностичні критерії оцінки глюкозотолерантного тесту |  постпрандиальная гіперглікемія |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати