Головна

експериментальна частина

  1. I. Загальна частина
  2. I. За виділеному суффиксу визначте частина мови.
  3. I. Теоретична частина
  4. II частина
  5. II. особлива частина
  6. III. НОРМАТИВНА ЧАСТИНА
  7. N-мірне векторний простір дійсних чисел. Комп'ютерна частина

збірним терміном небілкові сполуки азоту позначають всі низькомолекулярні азотовмісні речовини, Що залишаються в Центрифугат або фільтраті після осадження білків з біопроб. Синонім цього поняття в клінічної біохімії - «Залишковий азот крові», Кількість якого служить критерієм азотвиделітельной функції нирок (Табл. 16.3). Ряд компонентів залишкового азоту: сечовина, креатинін, білірубін мають самостійне діагностичне значення, в зв'язку, з чим визначаються за допомогою стандартних тест-наборів реактивів.

Таблиця 16.3

Компоненти залишкового азоту крові

16.3.1. Визначення кількості сечовини в біорідинах за допомогою тест-набору фірми Lachema (Чехія)

Сечовина - кінцевий продукт азотистого обміну у частині безхребетних, багатьох хребетних і більшості ссавців. Її нормальна концентрація в плазмі крові вказана в таблиці 16.3 і залежить від складу і кількості їжі, інтенсивності розпаду білків і ін. Азотистих з'єднань, знешкоджуючих функції печінки і азотовидільної функції нирок. Т.ч., цей діагностичний показник має велике значення для експериментальних і клінічних лабораторій.

Одним з кращих по специфічності, чутливості та відтворюваності, є фотометричний метод визначення сечовини з діацетілмонооксімом. Він заснований на тому, що в сильнокислой середовищі, присутності іонів тривалентного заліза і тіосемікарбазіда, сечовина утворює з діацетілмонооксімом комплекс червоного кольору, інтенсивність забарвлення якого залежить від її кількості. Увага!!! Тіосемікарбазід токсичний! При попаданні розчину на шкіру або в очі - рясно промити уражене місце водою. При попаданні всередину - відразу випити не менше 0,5 л води і викликати блювоту. Надаючи першу допомогу, користуватися інструкціями ІОТ-001-05, ІОТ-002-КДУ-06 і негайно довести до відома лаборанта і викладача!

хід аналізу: 1. Відповідно до п. 3.3.1, за допомогою напівавтоматичного дозатора, відповідно таблиці внести в 3 пробірки наступні розчини:

2. Вміст пробірок перемішати, прикрити горлечка ковпачками з алюмінієвої фольги і, витримати на киплячій водяній бані точно 10 хв!

3. Тут же, добре охолодити пробірки під краном і, не пізніше ніж через 15 хв., Виміряти абсорбцію розчинів на ФЕК, при довжині хвилі 540 нм (зелений світлофільтр), в кюветі товщиною 10 мм.

4. За формулою: Сечовина, ммоль / л = 16,65 х Аопита / А стандарту, розрахувати її концентрацію в досліджуваній сироватці

16.3.2. Визначення концентрації креатиніну вбіожідкостях за допомогою тест-набору фірми Lahema (Чехія)

Креатинін - ангідрид креатину, що міститься в крові, мозку і особливо в м'язах, як в формі транспортного макроергів - креатинфосфату, так і у вільному стані. Сліди креатину є в нормальній сечі, але в м'язах, він неферментативно і необоротно розпадається до креатиніну. Ендогенний креатинін виводиться в нирках клубочкової фільтрацією і секрецією в мікротрубочках, зі швидкістю ~ на 20% більше кліренсу інсуліну.

Його добова екскреція дивно пропорційна масі мускулатури (табл. 16.4) і становить в сечі жінок - 53-97 мкмоль / л і 61-115 мкмоль / л у чоловіків.

Таблиця 16.4

Вікові норми вмісту (мг / кг) в сечі

(По Murray R.K. et al., 1990)

Обмін цих сполук азоту пов'язаний з амінокислотою гліцином і незамінними для консументів, аргініном і метіоніном (рис. 16.2).

принцип методу: У лужному середовищі креатинін взаємодіє з пікринової кислотою, даючи оранжево-червоне забарвлення (реакція Jaffe), яку вимірюють фотометрически. Метод малоспеціфічен, тому що відновники типу глюкози, речовини з активної метиленової групою, кетокислот, сечовина, сечова кислота та пігменти: білірубін, Hb - можуть завищувати результати. Тому визначення ведуть після осадження білків біорідин.

Мал. 16.2. Схема обміну креатину і креатиніну

Хід роботи: 1. Відповідно до таблиці, внести в 3 пронумерованих центрифужних пробірки:

 * - У зв'язку з необхідністю економії стандартного розчину креатиніну, пробу 3 - Стандарт, з концентрацією креатиніну 177 мкмоль / л і добавкою СА, на групу студентів, виконує лише одна робоча пара.

2. Розчини перемішати і точно через 20 хв фотометріровать при ? 490 нм, в кюветі товщиною 10 мм проти контролю, абсорбцію проби і стандарту.

3. За формулою: Креатинін, мкмоль / л = 177 х А досвіду / А стандарту,

розрахувати концентрацію креатиніну в досліджуваній сироватці.

Нормальний вміст креатиніну в плазмі крові здорових людей: 0,7-1,5 мг / дл або 60-132 мкмоль / л. Воно може підвищуватися при прийомі ряду ліків і гострих і хронічних запальних хворобах нирок.

Питання для самоконтролю

16.4.1. Поясніть, чому азот концентрується не в з'єднаннях, а в атмосфері Землі?

16.4.2. Навіщо і які сполуки азоту потрібні організмам?

16.4.3. Що таке сінтрофія і чим вона викликана?

16.4.4. Що ви знаєте про генах азотфиксации?

16.4.5. Які сполуки азоту здатні засвоювати клітини-консументи?

16.4.5. Що таке вітаміни?

16.4.6. Яким показником оцінюють динамічні стану організмів і популяцій?

16.4.7. Поясніть поняття замінні і незамінні амінокислоти і, як і їх роль з позицій харчування людини?

16.4.8. Поясніть причини залежності консументов від зовнішніх джерел амінокислот.

16.4.9. У чому полягає повноцінність харчових білків для людини?

16.4.10. Що спільного у серинових протеїназ, що входять в системи пептідгідролаз ШКТ, згортання крові і комплементу?

16.4.11. Назвіть основні джерела амінокислот для клітин тварин.

16.4.12. Що таке залишковий азот крові і навіщо потрібен цей критерій?

16.4.13. Яку роль відіграє визначення сечовини в крові?

16.4.14. Чи є сенс визначати кількість сечовини в сечі і, за яких умов?

16.4.15. Що таке креатинін і, яку інформацію може дати його визначення в плазмі крові?




ПРОЦЕСІВ МЕТАБОЛІЗМУ | експериментальна частина | Завдання на будинок | І ДІАГНОСТИЧНА РОЛЬ ГЛЮКОЗИ | експериментальна частина | Завдання на будинок | ЛІПІДІВ І біомембранні | експериментальна частина | Завдання на будинок | СОЕДИНЕНИЙ |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати