загрузка...
загрузка...
На головну

Прилади, методи і середовища для культивування анаеробів

  1. II. Правова охорона навколишнього середовища та забезпечення екологічної безпеки
  2. III. ФІЗИЧНІ МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
  3. III. Етапи, регламент i методика правядзення дзелавой гульнi
  4. IX. ПРАВОВІ ОСНОВИ ІНФОРМАЦІЙНОГО ЗАБЕЗПЕЧЕННЯ ПРИРОДОКОРИСТУВАННЯ ТА ОХОРОНИ НАВКОЛИШНЬОГО СЕРЕДОВИЩА
  5. Part II. Methods and Means / методи і засоби
  6. VII. ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-психологічні методи дослідження МИСЛЕННЯ І МОВИ
  7. XII. ЛІЦЕНЗІЙНО-ДОГОВІРНІ ОСНОВИ ПРИРОДОКОРИСТУВАННЯ ТА ОХОРОНИ НАВКОЛИШНЬОГО СЕРЕДОВИЩА

Мікроанаеростат - Використовується для створення вакууму з дозованим вмістом кисню. Прилад являє собою герметично закривається посудину, забезпечений манометром, в який поміщають посіви і відкачують повітря. Мікроанаеростат поміщають в термостат.

ексикатор- Скляний лабораторний посуд з притертою кришкою. У його донної частини є додаткова ємність, куди наливається суміш пирогаллола і їдкого натру або гідросульфіту натрію і двууглекислой соди. На сітку-підставку поміщають посіви і притирають кришку за допомогою вазеліну. Ексикатор поміщають в термостат.

Метод Фортнера. У чашку Петрі наливають живильний агар з
1-2% глюкози. Посередині чашки стерильним скальпелем вирізують канавку шириною приблизно 1 см. Одну половину чашки засівають культурою аеробів (сарцин, кишкова паличка), другу - культурою анаеробів або досліджуваним на їх наявність матеріалом. Засіяну чашку закривають, герметизують і поміщають догори дном в термостат. Швидкозростаючі аероби, поглинаючи кисень, створюють тим самим сприятливі умови для росту анаеробних мікроорганізмів.

Метод Перетца. У стерильну чашку Петрі поміщають скляні палички, на які кладуть скляні пластинки або предметні скла. У пробірку з 20 мл розплавленого і охолодженого до 500З МПА з 10% глюкози (pH 7,0-7,2) вносять досліджуваний матеріал і додають 2-4 краплі 10% гидросульфита натрію на 10% розчині вуглекислої соди. Вміст пробірки швидко перемішують і виливають у чашку з таким розрахунком, щоб агар заповнив простір між скляною пластинкою і дном чашки. Чашки інкубують при 370З 24-48 годин. Колонії анаеробів виростають під скляною пластинкою.

Метод Вейон-Віньяль. У пробірку з 0,5% розплавленим і охолодженим до 40-450З цукровим агаром вносять досліджуваний матеріал і перемішують. При необхідності матеріал розводять шляхом перенесення в наступні 2-3 пробірки з розплавленим агаром. Вміст пробірок набирають в пастерівські піпетки. Після заповнення піпетки витягнутий кінець запаюють, а протилежний кінець закривають стерильною ваткою і заливають парафіном. Трубки поміщають в термостат; через 2-3 доби в агарі виростають глибинні колонії, видимі в світлі, які можна ізолювати. Для цього трубку надрізають напильником вище рівня наміченої колонії, надламують, а колонію витягають петлею і пересівають для накопичення чистої культури в відповідну живильне середовище.

Метод Біттнера. До кришки чашки Петрі з посівом досліджуваного матеріалу або виділеної культури анаеробів прикріплюють пакет з фільтрувального паперу, що містить пирогаллол, К2СО3 і тальк. Чашку герметизують за допомогою парафіну або скотча. Вміст пакету зволожується за рахунок конденсату, і інгредієнти вступають в реакцію, яка супроводжується поглинанням Про2 і виділенням СО2.

Газ-пак (Generbag anaer). Система Generbag anaer складається з повітронепроникних пакетів, виготовлених з прозорого пластику і генераторів, що містять суміш речовин, що поглинають кисень. Послідовність роботи: вийняти генератор з пакета, помістити в нижню частину повітронепроникного пакета, потім помістити чашки (або пробірки) з посівами і за допомогою спеціальної скріпки закрити пакет. Інкубація при 370С.

Середовищі Кітта-Тароцці. Містить м'ясо-пептони бульйон, 0,5% глюкози і 0,15% агару. На дно пробірки для адсорбції Про2 поміщають шматочки вареної печінки або фаршу шаром 1-1,5 см і заливають 6-7 мл середовища. Середу перед посівом регенерують (прогрівають 15-20 хв. На водяній бані для видалення повітря, а потім швидко охолоджують). Після посіву середу заливають вазеліновим маслом і поміщають в термостат.

Напіврідкий цукровий агар (високий стовпчик). У пробірку з
6-7 мл розплавленого і охолодженого до 40-450З напіврідкого поживного агару, що містить 0,5-1% глюкози, вносять досліджуваний матеріал і перемішують. Посіви поміщають в термостат.

Середовище для контролю стерильності (СКС). Зростання багатьох анаеробних мікроорганізмів можливий тільки на середовищах з низьким окислювально-відновним потенціалом. Тому в середовища додають відновники, наприклад, тіогліколевую кислоту або її натрієву сіль, цистеїн, аскорбінову кислоту. Функції восстановителей виконують і інші компоненти середовища: глюкоза, пептони. СКС містить живильний бульйон, вітамінний препарат ЕКД, NaCl, Na2CO3, глюкозу, тиогликолят натрію, цистеїн, агар (0,75%). Середовище розливають в пробірки по 6-7 мл.

Контрольні питання

Хімічний склад бактеріальної клітини: зміст, локалізація в клітинних структурах і біологічна роль води, білків, нуклеїнових кислот, ліпідів, вуглеводів і мінеральних речовин. Джерела азоту, вуглецю. Фактори зростання. Що таке енергетичний і конструктивний метаболізм? Особливості обміну речовин бактерій. Ферменти бактерій. Механізм розщеплення речовин. Способи надходження їх в клітку. Типи харчування мікробів. Чи можуть мікроорганізми змінити тип харчування? Які типи харчування патогенних мікробів? Яким вимогам повинні відповідати поживні середовища? Класифікація поживних середовищ за консистенцією, за цільовим призначенням. Основні поживні середовища. Спеціальні поживні середовища, їх назви; для яких бактерій призначені? Електівниє поживні середовища, склад, застосування. Наведіть приклади. Диференційно-діагностичні середовища, їх назви; для чого застосовуються? Що таке зростання мікробів, розмноження мікробів? Як розмножуються бактерії? Фази росту бактеріальної культури в рідкому поживному середовищі (накреслити криву). Розмноження бактерій в безперервно-проточною середовищі. Умови культивування бактерій. Що таке культура бактерій, чиста культура, штам? Особливості біологічного окислення у мікробів. Групи мікробів по типу біологічного окислення. Які відмінності між аеробних і анаеробних типом (основні етапи, ферменти, участь вільного кисню, кінцевий акцептор водню, продукти окислення). Перерахуйте патогенні анаероби. Що таке окислювально-відновний потенціал середовища, які мікроби краще ростуть при низьких його значеннях, які - при більш високих? Типи бродіння. Що таке аерація живильного середовища, як вона здійснюється? Особливості культивування анаеробних бактерій. Середовища, методи і прилади, які використовуються для їх культивування. Середа Китта-Тароцці: на чому грунтується її дію, що входить до її складу, що роблять із середовищем перед посівом і для чого? Розповісти поетапно виділення чистої культури мікробів-аеробів. Розповісти поетапно виділення чистої культури мікробів-анаеробів. Що таке псіхрофіли, мезофіли, термофіли? Оптимальна температура для росту патогенних мікробів.

 




Самостійна робота студента на практичному занятті | СТРУКТУРА БАКТЕРІАЛЬНОЇ КЛІТИНИ | Після вивчення теми студент повинен вміти | Самостійна робота студента на практичному занятті | Після вивчення теми студент повинен вміти | Самостійна робота студента на практичному занятті | Диференціювати мікроорганізми за морфологічними, тинкторіальними властивостям і інтерпретувати отримані результати. | Після вивчення теми студент повинен вміти | Додатковий матеріал до заняття | Методи виділення чистих культур бактерій |

загрузка...
© um.co.ua - учбові матеріали та реферати