загрузка...
загрузка...
На головну

Визначення тривалості кровотечі (по Дуке)

  1. B. Визначення прибутковості ОФЗ-ПК і ОГСЗ.
  2. II. Поняття частоти випадкової події. Статистичне визначення ймовірності.
  3. II.1.1. Визначення теоретичних і практичних завдань психології та педагогіки
  4. IV. ШВИДКА СИГНАЛИЗАЦИЯ І ТОЧНЕ ВИЗНАЧЕННЯ МІСЦЯ АВАРІЇ
  5. V. Визначення ймовірності і непевного простору.
  6. VI. Найпростіше «визначення», його призначення і структура
  7. А. Визначення курсової вартості середньострокової і довгострокової бескупонних облігацій.

 Принцип.Визначається тривалість кровотечі з капілярів після проколу шкіри скарифікатором.

 Хід роботи. Визначення може проводитися при проколі пальця або мочки вуха. Глибина проколу повинна бути не менше 3 мм - тільки за цієї умови кров з ранки виділяється мимоволі, без натиску. Відразу після проколу включають секундомір. Першу краплю крові не видаляють ватою, як зазвичай, а торкаються до неї фільтрувальної папером, яка вбирає кров. Далі знімають фільтрувальної папером виступаючі краплі крові через кожні 30 секунд. Поступово краплі крові стають все менше. Коли сліди крові перестануть залишатися, секундомір вимикають.

Джерела помилок: недостатньо глибокий прокол, поспішне зняття крапель крові, дотик фільтрувальної папером до шкіри, що сприяє зупинці кровотечі.

нормальні величини. Тривалість кровотечі по Дуке становить 2-4 хвилини.

діагностичне значення. Практичне значення має подовження часу кровотечі, що спостерігається при тромбоцитопеніях, захворюваннях печінки, недостатності вітаміну С, злоякісних пухлинах і ін. При гемофілії цей тест залишається в межах норми.

 Визначення часу згортання капілярної крові (по Сухарева)

Принцип.Визначається час утворення згустка крові в капілярі Панченкова.

 Хід роботи. Проколюють шкіру, видаляють першу краплю крові. Набирають самопливом кров в чистий сухий капіляр Панченкова до мітки «70-75» (25-30деленій) без бульбашок повітря і включають секундомір. Нахилом капіляра переміщують кров на середину трубки. Через кожні 30 секунд нахиляють капіляр черзі вправо і вліво під кутом 45 градусів. При цьому капіляр необхідно щільно тримати в руці, щоб зберегти вищу і постійну температуру системи згортання крові. На початку дослідження кров вільно переміщається всередині капіляра, а потім її рух сповільнюється і з'являється «хвостик» з ниток фібрину - це говорить про початок згортання крові. При повному згортанні кров перестає рухатися. Моменти початку і кінця згортання крові засікає за секундоміром.

нормальні величини. Початок згортання: 30 секунд - 2 хвилини; кінець згортання: 3-5 хвилин.

діагностичне значення. Подовження часу згортання крові спостерігається при важкій недостатності факторів, що беруть участь у внутрішньому шляху утворення протромбінази, дефіциті протромбіну і фібриногену, а також при передозуванні гепарину.

8.4. Контрольні запитання ПО ТЕМІ «Геморагічні діатези»

1. Що означає термін «Геморагічні діатези»?

2. На які групи діляться геморагічні діатези?

3. Як проводиться лабораторна діагностика тромбоцитопенії, тромбоцитопатії, коагулопатії, вазопатії?

4. Морфологія тромбоцитів.

5. Функції тромбоцитів.

6. Методи підрахунку кількості тромбоцитів в крові.

7. Нормальна кількість тромбоцитів у крові.

8. Причини тромбоцитопеній і тромбоцитоз.

9. Який механізм гемостазу характеризує тривалість кровотечі та час згортання капілярної крові?

10. Тривалість кровотечі в нормі і при різних видах геморагічного діатезу.

11. Час згортання капілярної крові в нормі і при тромбоцитопенії, коагулопатіях, вазопатій.

ГЛАВА 9

ГРУПИ І резус-ПРИНАЛЕЖНІСТЬ КРОВІ

На поверхні клітин крові людини є велика кількість структур, які відносяться до антигенів, тобто при попаданні в організм іншої людини стимулюють вироблення антитіл. Їх називають також ізоантігенамі [від грец. isos однаковий], так як вони зустрічаються у представників одного виду, на відміну від гетероантігенов [від грец. heteros інший, інший], які є у інших видів ссавців.

Засновник науки про групах крові Карл Ландштейнер в 1901р. виявив відмінності в крові людей, які згодом були позначені як групи крові системи АВ0. Довгий час відомості про групових розбіжностях ставилися тільки до еритроцитів. Пізніше стало відомо, що такі відмінності властиві й інших компонентів крові: лейкоцитів, тромбоцитів, білків плазми. До теперішнього часу відкрито 26 систем антигенів еритроцитів (АВ0, Rh-резус, MNS, Kell, Lewis та ін.), Що включають 270 антигенів, системи антигенів лейкоцитів (HLA, NA, NB, NC), тромбоцитів (HPA) і 10 систем білків плазми. З позицій сучасної імуногематологіі, кожна людина має свою власну унікальну групу крові - набір антигенів, які можуть стати причиною імунологічної несумісності при переливанні крові та її компонентів, вагітності, трансплантації органів.

Однак у практичній медицині під групами крові традиційно розуміють поєднання тільки антигенів еритроцитів системи АВ0, так як саме вони в першу чергу визначають сумісність при переливанні крові.

9.1. ГРУПИ КРОВІ СИСТЕМИ АВ0

Група крові (в традиційному розумінні) - це поєднання антигенів еритроцитів системи АВ0, яке генетично зумовлено і не змінюється протягом життя.

До системи груп крові АВ0 належать два групових антигену (агглютиногена) - А і В і два види антитіл до них, які в даний час прийнято позначати анти-А і анти-В антитіла натомість використовувалися раніше ?- і ?- ізогемагглютінінов.

Унікальність системи АВ0 полягає в тому, що в плазмі у неімунних людей є природні антитіла до відсутнім на еритроцитах антигену. У всіх інших системах еритроцитарних антигенів антитіла не є вродженими і можуть з'явитися тільки внаслідок антигенної стимуляції (переливання крові, вагітності).

Різні поєднання антигенів і антитіл системи АВ0 утворюють 4 групи крові, які за міжнародною номенклатурою позначаються буквами за назвою наявних антигенів: 0, А, В і АВ.

Таблиця 35

Групи крові системи АВ0

 Міжнародне позначення групи крові  Повна групова формула кровісістеми АВ0  характеристика групи
   0?? (I)  На еритроцитах антигенів А і В нет.В плазмі містяться аглютиніни ? и ?.
А А? (II)  На еритроцитах міститься антиген А; в плазмі - аглютиніни ?.
В В? (III)  На еритроцитах міститься антиген В; в плазмі - аглютиніни ?.
 АВ  АВ0 (IV)  На еритроцитах містяться антигени А і В; в плазмі аглютиніни ? и ? немає.

Найчастіше у людей буває перша (35%) і друга група крові (35-40%), рідше - третя (15-20%) і четверта (5-10%) групи.

У більшості випадків антиген А має велику антигенну силою, тобто дає з антитілами анти-А виражену реакцію аглютинації. У 3-5% людей з другою групою і у 25-30% людей з четвертою групою крові антиген А має слабкі антигенні властивості. Його позначають як антиген А2. Слабкі види антигену А дають з антитілами анти-А слабку аглютинацію (дрібну, пізню), що може призвести до помилок при визначенні групи крові.

Антитіла анти-А так же, як антиген А, можуть бути представлені двома різновидами, які відрізняються за часом дії - анти-А1 і анти-А2. Антитіла анти-А1 відносяться до антитіл швидкої дії, а анти-А 2 - Уповільненої дії. Тому при визначенні групи крові дослідження необхідно проводити протягом 5 хвилин.

У сироватці у багатьох новонароджених групові антитіла відсутні. Вони з'являються зазвичай протягом перших місяців життя, і титр їх поступово наростає, досягаючи максимуму у віці 10-20 років. У старості і при імунодефіцитних станах титр антитіл може знижуватися.

Клінічне значення груп крові дуже велике, так як дає можливість без ускладнень переливати кров і її компоненти від однієї людини (донора) іншій людині (реципієнту).

В даний час для переливання використовують тільки компоненти крові. Цільну кров переливають у виняткових випадках - за життєвими показаннями і при відсутності необхідних гемокомпонентов. Найчастіше для трансфузій застосовують еритроцитної маси і плазму, бажано тієї ж групи крові, до якої відноситься реципієнт. У разі необхідності та в невеликих кількостях (до 500мл) можливе переливання еритроцитної маси не одногруппной, а сумісною з реципієнтом крові.

При переливанні крові і еритроцитної маси неухильно дотримуються правила: еритроцити донора не повинні містити антигену, відповідного антитіл реципієнта, так як в цьому випадку відбувається аглютинація і масивний гемоліз введених донорських еритроцитів - небезпечне для життя гемотрансфузійним ускладнення. Невелика кількість еритромаси 0 (I) групи крові, еритроцити якої не містять антигенів А і В, можна перелити реципієнту з будь-якою групою крові, тому осіб з I групою крові називають «універсальні донори». До 500 мл еритроцитної маси а (II) і в (III) груп крові можна перелити, крім одногруппной, тільки особам з Ав (IV) групою крові. Еритроцити Ав (IV) групи крові навіть у невеликих кількостях не може бути перелита жодній групі, крім IV, зате в неї можна перелити невелику кількість еритромаси всіх груп. Тому осіб з Ав (IV) групою крові називають «універсальними реципієнтами».

При переливанні плазми крові враховують антитіла донора. Плазма донора не повинна містити антитіл, спрямованих проти антигенів реципієнта. Плазма 0 (I) групи крові містить обидва агглютинина - ? і ? і її не можна переливати ні в яку групу крові, крім I. Невелика кількість плазми II і III груп крові може бути перелито тільки в 0 (I) і однойменні групи. Плазма Ав (IV) групи не містить аглютинінів і може бути перелита (в невеликій кількості) людям з будь-якою групою крові.

9.1.2. Методи визначення групи крові

Визначення груп крові проводиться відповідно до наказу МОЗ РФ №2 від 9.01.98 «Про затвердження інструкцій щодо іммуносерологіі».

В даний час для визначення групи крові використовуються 2 групи методів.

1. Методи, в основі яких лежить реакція аглютинації:

- Пряма реакція з поліклональними реагентами (стандартними ізогемагглютінірующіх сироватками I-III груп) або з моноклональними реагентами (Цоліклони анти-А і анти-В);

- Перехресний метод.

2. Методи гелевою технології (поєднання реакції аглютинації і гель

фільтрації).

Визначення групи крові системи АВ0 за допомогою стандартних ізогемагглютінірующіх сироваток

 Принцип. Виявляють агглютіногени еритроцитів за допомогою реакції аглютинації зі стандартними сироватками, що містять аглютиніни. За наявністю або відсутністю агглютиногенов в досліджуваних еритроцитах судять про груповий приналежності крові.

 Реагенти.

1. Стандартні ізогемагглютінірующіх сироватки 0 (I), а (II) і в (III) груп двох різних серій кожної групи.

2. Стандартна ізогемагглютінірующіх сироватка Ав (IV) групи.

3. Ізотонічний розчин хлориду натрію - 0,9% розчин NaCl.

 Спеціальне оснащення: біла пластинка із змочуваною поверхнею, очні піпетки, хімічні стаканчики, скляна паличка, вата, спирт, скарифікатори.

 Підготовча робота. Визначення груп крові повинно проводитися при хорошому освітленні і при температурі 15-25?С. Флакони зі стандартними сироватками ставлять в спеціальний штатив в наступному порядку: зліва - стандартні сироватки 0 (I) групи (одна ззаду інший), в середині - стандартні сироватки а (II) групи і праворуч - стандартні сироватки в (III) групи. Окремо ставлять стандартну сироватку Ав (IV) групи крові, вживану в якості додаткового контролю. У кожен флакон зі стандартною сироваткою опускають суху чисту очну піпетку. Для промивання скляних паличок в хімічний стаканчик наливають воду. У стаканчик з фізіологічним розчином опускають очну піпетку.

 Техніка визначення групи крові за допомогою стандартних сироваток. На верхній частині пластинки пишуть прізвище та ініціали особи, у якого визначають групу крові. Ділять склографом пластинку на 6 частин: по 3 в 2 ряди. У лівому стовпчику зверху підписують анти-А + В; в середньому стовпці - анти-В; в правій колонці - анти-А. Під відповідними позначками на платівку з допомогою очної піпетки наносять по одній великій краплі (0,1 мл) ізогемагглютінірующіх сироватки 1-3 груп двох різних серій - всього 6 крапель. Кожну піпетку відразу ж опускають в той же флакон з сироваткою, з якого вона була взята. Кров для дослідження беруть з пальця. Поміщають одну краплю крові в лунку предметного скла або на нижню частину пластинки. Наносять чистою сухою скляною паличкою маленькі краплі крові поряд з кожною краплею стандартної сироватки. При цьому краплі крові повинні бути приблизно в 10 разів менше крапель сироваток. Перемішують краплі стандартних сироваток з розташованими поруч краплями крові скляною паличкою. Після розмішування кожної краплі скляну паличку промивають в стаканчику з водою і насухо витирають ватою або фільтрувальним папером. Помічають час. Протягом 3 хвилин періодично похитують пластинку. Через 3 хвилини в ті краплі, де наступила аглютинація, додають по 1 краплі ізотонічного розчину NaCl і періодично похитують платівку ще протягом 2 хвилин. Через 5 хвилин після перемішування крапель оцінюють результати реакції.


 Трактування результатів реакції. Реакція аглютинація в кожній краплі може бути позитивною або негативною. При позитивній реакції, тобто при наявності аглютинації, в суміші з'являються видимі на око червоні зерна склеєних еритроцитів. Сироватка при цьому повністю або частково знебарвлюється. При негативній реакції, тобто відсутності аглютинації, рідина залишається рівномірно забарвленою в червоний колір. Результати реакцій в краплях з сироваткою однієї і тієї ж групи повинні збігатися. Якщо аглютинація наступила в усіх краплях, тобто досліджувана кров належить до Ав (IV) групи, то для виключення неспецифічної аглютинації додатково проводять контрольне дослідження зі стандартною сироваткою Ав (IV) групи. Для цього на пластинку наносять 1 велику краплю стандартної сироватки Ав (IV) групи і поряд з нею - маленьку краплю досліджуваної крові. Сироватку і кров перемішують і спостерігають за ходом реакції протягом 5 хвилин, періодично похитуючи пластинку. Відсутність аглютинації в цій краплі підтверджує Ав (IV) групу досліджуваної крові. Поява аглютинації з сироваткою Ав (IV) групи говорить про неспецифічний характер спостерігається аглютинації.

Таблиця 36

Оцінка результатів визначення групи крові за допомогою стандартних ізогемагглютінірующіх сироваток

 Ізогемаггютінірующіе сироватки  Група досліджуваної крові
 Анти-А + В  Анти-В  Анти-А
 - -  - -  - -  0 (I)
 + +  - -  + +  A (II)
 + +  + +  - -  B (III)
 + +  + + Контроль з сироваткою Ав (IV) -  + +  AB (IV)

(-) Відсутність аглютинації

(+) Наявність аглютинації.

 Визначення групи крові системи АВ0 за допомогою Цоліклони анти-А і анти-В

 Принцип. Такий же, як при визначенні груп крові зі стандартними сироватками - тобто виявлення агглютиногенов в досліджуваних еритроцитах за допомогою агглютінінов, що містяться в Цоліклони анти-А і анти-В.

 реагенти: Цоліклони анти-А (рожевого кольору) і Цоліклони анти-В (блакитного кольору).

Цоліклони анти-А і анти-В містять моноклональні антитіла анти-А і анти-В (імуноглобуліни класу М) і не містять антитіла інший специфічності. Цоліклони представляють собою розведену асцитної рідина мишей - носіїв гібридом анти-А і анти-В.

 Техніка визначення. Визначення груп крові повинно проводитися при хорошому освітленні і при температурі 15-25?С. Визначення може проводитися в нативної крові з консервантом або в крові без консерванту, в тому числі взятої з пальця. Розмічають пластинку на 2 частини. Ліву частину пластинки підписують «анти - А», праву - «анти - В». Наносять по одній великій (0,1 мл) краплі Цоліклони анти-А і анти-В під відповідними позначками. Наносять по одній маленькій краплі крові (в 10 разів меншою, ніж краплі реагентів) поряд з кожною краплею Цоліклони. Перемішують краплі крові з реагентом скляною паличкою, промиваючи після перемішування паличку у воді і витираючи її насухо. Помічають час. Періодично похитуючи пластинку, чекають 3 хвилини. Аглютинація еритроцитів з Цоліклони зазвичай настає в перші 3-6 секунд, але оцінку результатів реакції ведуть через 3 хвилини, щоб не пропустити пізню агглютинацию зі слабкими різновидами антигену А чи В.

 Трактування результатів. Результат реакції може бути позитивним або негативним. Позитивний результат виражається в аглютинації еритроцитів, видною неозброєним оком у вигляді дрібних червоних агрегатів, швидко зливаються в великі пластівці. При негативній реакції крапля залишається рівномірно забарвленою в червоний колір, агглютінати не виявляються.

Таблиця 37

Оцінка результатів визначення групи крові системи АВ0

за допомогою Цоліклони анти-А і анти-В

 Результати реакції з Цоліклони  Группаісследуемой крові
 анти-А  анти-В
- -  0 (I)
+ -  A (II)
- +  B (III)
+ +  AB (IV)

(-) - Відсутність аглютинації

(+) - Наявність аглютинації.

Визначення групи крові системи АВ0 перехресним методом

 Принцип. Одночасне визначення агглютиногенов еритроцитів досліджуваної крові за допомогою стандартних сироваток і аглютинінів досліджуваної сироватки за допомогою стандартних еритроцитів.

 Реагенти.

1. Стандартні ізогемагглютінірующіх сироватки 0 (I) ??, а (II) ? і в (III) ? груп двох різних серій кожної групи.

2. Стандартні еритроцити груп 0 (I), а (II) і в (III).

3. Ізотонічний розчин хлориду натрію - 0,9% NaCl.

 Спеціальне оснащення: біла пластинка із змочуваною поверхнею, очні піпетки, хімічні стаканчики, скляна паличка, вата, спирт, скарифікатори.

 Підготовча робота. Визначення груп крові повинно проводитися при хорошому освітленні і при температурі 15-25?С. Флакони зі стандартними сироватками ставлять в спеціальний штатив в наступному порядку: зліва - стандартні сироватки 0 (I) групи (одна ззаду інший), в середині - стандартні сироватки а (II) групи і праворуч - стандартні сироватки в (III) групи. У кожен флакон зі стандартною сироваткою опускають суху чисту очну піпетку. У штатив встановлюють пробірки або флакони зі стандартними еритроцитами в наступному порядку: зліва групи 0 (I), в середині - групи а (II) і праворуч - групи в (III). Для промивання скляних паличок в хімічний стаканчик наливають воду. У стаканчик з фізіологічним розчином NaCl опускають очну піпетку.


 Техніка визначення. Кров для дослідження беруть з вени або пальця в суху пробірку. Кров центрифугируют або залишають стояти на 20-30 хвилин для відділення сироватки. Для кращого відділення сироватки слід через 3-5 хвилин відокремити згорток від стінок пробірки, обвівши його скляною паличкою. Роблять на платівці позначення склографом відповідно до таблиці. У верхній частині пластинки у відповідних позначень наносять по одній великій краплі (0,1 мл) стандартних ізогемагглютінірующіх сироваток I-III груп двох різних серій. У нижній частині пластинки у відповідних позначень наносять по одній маленькій краплі (0,01мл) стандартних еритроцитів I-III груп крові. З пробірки з досліджуваної кров'ю обережно, щоб не збовтати еритроцити, піпеткою відсмоктують сироватку і наносять її по одній великій краплі (0,1 мл) на краплі стандартних еритроцитів. З дна пробірки цієї ж піпеткою набирають еритроцити і наносять їх по одній маленькій краплі (0,01мл) поряд з кожної їх 6 крапель стандартних сироваток. Перемішують скляною паличкою у всіх 9 краплях сироватку з еритроцитами. Після перемішування кожної краплі паличку промивають у воді і насухо витирають. Помічають час. Протягом 3 хвилин періодично похитують пластинку. Через 3 хвилини в ті краплі, де наступила аглютинація, додають по 1 краплі ізотонічного розчину NaCl і періодично похитують платівку ще протягом 2 хвилин. Через 5 хвилин після перемішування крапель оцінюють результати реакції.

Таблиця 38

Оцінка результатів визначення груп крові перехресним методом

 ізогемагглютінірующіх сироватки
 анти А + В - -  анти-В - -  анти-А - -
 стандартні еритроцити
 -  А +  В +
 Досліджувана кров належить до0 (I) групі
 ізогемагглютінірующіх сироватки
 анти А + В + +  анти-В - -  анти-А + +
 стандартні еритроцити
 -  А -  В +
 Досліджувана кров належить кA (II) групи
 ізогемагглютінірующіх сироватки
 анти А + В + +  анти-В + +  анти-А - -
 стандартні еритроцити
 -  А +  В -
 Досліджувана кров належить кB (III) групи
 ізогемагглютінірующіх сироватки
 анти А + В + +  анти-В + +  анти-А + +
 стандартні еритроцити
 -  А -  В -
 Досліджувана кров належить до AB (IV) групи

 Трактування результатів. Реакція аглютинація в кожній краплі може бути позитивною або негативною. При позитивній реакції, тобто при наявності аглютинації, в суміші з'являються видимі на око червоні зернятка склеєних еритроцитів. Сироватка при цьому повністю або частково знебарвлюється. При негативній реакції, тобто відсутності аглютинації, рідина залишається рівномірно забарвленою в червоний колір.

Результати реакцій, отриманих за допомогою стандартних сироваток і стандартних еритроцитів, повинні збігатися, тобто вказувати на вміст агглютиногенов і аглютиніни, які відповідають одній і тій же групі крові.

9.2. Резус-ПРИНАЛЕЖНІСТЬ КРОВІ

Система антигенів еритроцитів Резус, друга за активністю після системи АВ0, відкрита в 1940 році К. Ландштейнером і Вінером. Свою назву антиген отримав від мавпи Macacus Rhesus, у якій він був виявлений. Резус-фактор міститься на еритроцитах, лейкоцитах, тромбоцитах, в різних органах і тканинах, а також в тканинної рідини і навколоплідних водах людини. Освіта антигену резус починається з 8-10 тижні ембріонального розвитку.

В даний час система Резус налічує понад 75 антигенів, п'ять з яких є клінічно значущими: D, C,  , Е, е. Відсутність антигену D позначають буквою d. Найсильнішим антигеном системи Резус є антиген D, який і мається на увазі під терміном «резус-фактор». Саме за наявністю або відсутністю на еритроцитах антигену D кров ділиться на резус-позитивну (Rh +) і резус-негативну (rh-). Різні поєднання антигенів резус в крові окремих людей складають 28 груп (фенотипів), які представляють собою набір антигенів резус - по одному від кожного з батьків, (наприклад, СсDеe, ССddЕе). Чотирнадцять фенотипів містять антиген D і є резус - позитивними, а інші 14 не містять антигену D і їх відносять до резус - негативним. Однак така оцінка резус-приналежності крові застосовується лише для реципієнтів. Донори ж вважаються rh (-), якщо у них на еритроцитах не міститься ні антиген D, ні антиген С, ні антиген Е, тобто при фенотипі ccddee. Це пов'язано з тим, що, хоча антигени С і Е менш активні, ніж D, до них також можуть вироблятися антитіла.

Кількість резус-позитивних і резус-негативних людей різниться у представників різних рас. У європеоїдів, в тому числі і в РФ, частка rh (-) осіб складає в середньому 14-16%, в той час як серед монголоїдів rh (-) фенотип зустрічається менш ніж у 1% населення, і резус-конфлікти у них надзвичайно рідкісні.

У 1-3% резус-позитивних осіб на еритроцитах міститься слабкий варіант антигену D (Du), Який дає дрібну, сумнівну агглютинацию з антитілами анти-D. У цих випадках резус-приналежність крові реципієнтів і вагітних жінок оцінюють як rh (-), а кров донорів - як Rh (+).

Система Резус на відміну від системи АВ0 не має природних антитіл. Антитіла антирезус з'являються тільки після імунізації резус-негативного організму в результаті переливання резус-позитивної крові або вагітності резус-позитивним плодом. Антитіла до резус-антигенів зберігаються кілька років, іноді все життя. У більшості випадків титр антитіл з часом поступово знижується, але при повторному попаданні в організм резус-антигену різко (лавиноподібно) зростає.

Резус антитіла розрізняються по специфічності (анти-D, анти-С, анти-Е та ін.) І по серологічним властивостям (повні і неповні). Повні антитіла викликають аглютинацію еритроцитів в сольовому середовищі при кімнатній температурі, а неповні - при підвищеній температурі і в колоїдної середовищі (при додаванні желатину, поліглюкіну, сироваткового білка). Повні антитіла (IgM) синтезуються на початку імунної реакції і незабаром зникають з крові. Неповні антитіла (IgG) з'являються пізніше і є причиною розвитку гемолітичної хвороби новонароджених, так як проходять через плаценту і викликають гемоліз еритроцитів плода.

Визначення резус-належностікрові основанона реакції аглютинації еритроцитів досліджуваної крові з антитілами, що містяться в реагентах антирезус. Реагенти антирезус діляться на 2 групи: з повними і неповними антитілами. Реагенти, що містять повні антитіла класу IgM, дають реакцію аглютинації в сольовому середовищі. До них відносяться Цоліклони анти-D супер, анти-С супер, анти-Е супер, стандартні сироватки антирезус анти-D з повними антитілами і ін. Реагенти, що містять неповні антитіла класу IgG (Цоліклони анти-D, стандартні універсальні реагенти антирезус анти- D, анти-DС, анти-DСЕ і т. д.), дають реакцію аглютинації тільки в колоїдної середовищі. Залежно від форми містяться в реагенте антитіл визначення резус-приналежності крові проводиться в різних умовах (в сольовий або колоїдної середовищі, при кімнатній температурі або при нагріванні), тому до кожного реагенту додається інструкція по його використанню. В даний час перевага віддається моноклональних реагентів антирезус (Цоліклони). Для визначення антигенів системи Резус використовується також гелева технологія.

Визначення резус-належності крові за допомогою Цоліклони анти-D супер (анти-D IgM моноклонального реагенту)

 Принцип. Антіген D досліджуваних еритроцитів виявляють реакцією аглютинації в сольовому середовищі з моноклональними антитілами анти-D, що містяться в Цоліклони анти-D супер.

Цоліклони анти-D супер виготовлений на основі культуральної рідини клітинної гетерогібрідоми, отриманої в результаті злиття людської лімфобластоідних лінії і мієломної клітинної лінією миші. Реагент містить моноклональні повні антитіла анти-D класу IgM і не містить антитіл іншої специфічності, тому може бути використаний для виявлення антигену D в еритроцитах будь-якої групи крові.

реагенти: Цоліклони анти-D супер; стандартні Rh (+) і rh (-) еритроцити - для контролю специфічності реакції.

Техніка дослідження. Визначення антигену D за допомогою Цоліклони анти-D супер можна виробляти в консервованої крові, в крові, взятої без консерванту, а також в крові з пальця.

На пластину з смачиваемой поверхнею наносять велику краплю (близько 0,1 мл) Цоліклони анти-D супер, а поруч - маленьку краплю (0,01-0,05мл) крові і змішують кров з реагентом скляною паличкою. Чекають 20-30 секунд, а потім періодично похитують пластинку. Через 3 хвилини оцінюють результати реакції.

Трактування результатів. При наявності аглютинації кров оцінюється як резус-позитивна, а за відсутності аглютинації - як резус-негативна. Для контролю специфічності при кожному дослідженні необхідно ставити реакцію зі стандартними D-позитивними та D-негативними еритроцитами. Результати визначення резус-приналежності досліджуваної крові враховують як справжні тільки в тому випадку, якщо зі стандартними резус-позитивними еритроцитами реагент дав реакцію аглютинації, а зі стандартними резус-негативними еритроцитами аглютинації немає.

Зразки крові, які при дослідженні Цоліклони анти-D супер дали негативний результат, необхідно додатково тестувати за допомогою реагентів, що містять неповні антитіла IgG для виявлення антигену Du (Поликлональной сироваткою або моноклональних анти-D реагентом).

9.3. Контрольні питання До ЧОЛІ «ГРУПИ І резус-ПРИНАЛЕЖНІСТЬ КРОВІ»

1. Що означає поняття «Група крові» в практичній медицині і з позицій сучасної імуногематології?

2. Дайте характеристику груп крові системи АВ0.

3. Якими методами можна визначити групу крові?

4. Який принцип лежить в основі всіх методів визначення групи крові?

5. Які реагенти використовуються для визначення групи крові прямою реакцією?

6. Опишіть результати визначення другої групи крові за допомогою прямої реакції.

7. Чому перехресний метод визначення групи крові так називається?

8. Реагенти для перехресного методу визначення групи крові.

9. Результати визначення третьої групи крові перехресним методом.

10. Що таке Цоліклони?

11. Результати визначення четвертої групи крові з Цоліклони.

12. Які правила необхідно дотримуватися при переливанні еритроцитної маси та плазми крові?

13. Які антигени належать до системи Резус?

14. У чому полягає відмінність між системами антигенів АВ0 і Резус?

15. Клінічне значення антигенів системи Резус.

16. За яким принципом кров донорів і реципієнтів відносять до резус-позитивної або резус-негативної?

17. Які реагенти можуть використовуватися для визначення резус-приналежності крові?

18. У чому полягає різниця Цоліклони анти-D і анти-D супер?

19. Що таке антиген Du ? Його клінічне значення.

20. Фенотип резус-негативного донора.





ЗМІНА КІЛЬКОСТІ ОКРЕМИХ ВИДІВ ЛЕЙКОЦИТІВ ПРИ ПАТОЛОГІЇ | Вікові зміни крові | Спадкові аномалії морфології лейкоцитів | Зміна крові при гнійно-запальних і інфекційних захворюваннях | АВТОМАТИЧНІ МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ КЛІТИН КРОВІ | СХЕМА Кровотворення | Зміна морфології клітин крові при дозріванні | Причини і ознаки гемолітичних анемій | Уніфікований метод визначення осмотичної резистентності еритроцитів | Класифікація гострих лейкозів |

загрузка...
© um.co.ua - учбові матеріали та реферати