Головна

Уніфікований метод визначення осмотичної резистентності еритроцитів

  1. I метод.
  2. I. Методика бухгалтерського обліку
  3. I. МЕТОДОЛОГІЯ
  4. I. Різноманіття характеристик гри. Проблеми вихідного визначення
  5. I. ОРГАНІЗАЦІЙНО-МЕТОДИЧНИЙ РОЗДІЛ
  6. II метод.
  7. Ii. Методики зовнішньої іммобілізації

Принцип. Осмотична резистентність еритроцитів визначається за ступенем їх гемолізу в гіпотонічних розчинах хлориду натрію.

 Реактиви.

1. Основний розчин, по осмотичної концентрації відповідний 10% хлориду натрію: двозаміщений фосфат натрію 27,31г; однозаміщений фосфат натрію 4,86г; хлорид натрію 180г; дистильована вода до 2л. рН основного розчину становить 7,4.

2. Робочий розчин - готується з основного шляхом розведення в 10 разів. За осмотичної концентрації він відповідає 1% розчину хлориду натрію.

3. Гепарин.

 Хід визначення. У дві стерильні пробірки, що містять по 2 краплі гепарину, вносять по 1,5 мл крові, добре перемішують. Кров з однієї пробірки досліджують відразу ж, а другу - на наступний день, після інкубації в термостаті при 37 ° С протягом 24 годин.

 №пробірок  Колічество1% NaCl, мл  Дист. вода, мл  КонцентраціяNaCl  екстінція Е  Гемоліз,%
 Ісслед.крові  В нормі
 5,0 -  1%  контроль  0%
 4,25  0,75  0,85%    
 3,75  1,25  0,75%    
 3,5  1,5  0,7%    
 3,25  1,75  0,65%    
 3,0  2,0  0,6%    
 2,75  2,25  0,55%    
 2,5  2,5  0,5%      0-6%
 2,25  2,75  0,45%      5-45%
 2,0  3,0  0,4%      50-100
 1,75  3,25  0,35%      90-100
 1,5  3,5  0,3%      97-100
 1,0  4,0  0,2%      98-100
 0,5  4,5  0,1%    100%  100%

У 14 центрифужних пробірках готують ряд розведень з робочого розчину хлориду натрію відповідно до таблиці. У кожну пробірку вносять по 1 капіляри Салі гепаринизированной крові. Перемішують вміст всіх 14 пробірок, починаючи з першої, і залишають стояти 30 хвилин при кімнатній температурі. Центрифугують вміст пробірок протягом 5 хвилин при 2000 об / хв. Колоріметріруют супернатант пробірок №№ 2-14 за умов: світлофільтр - зелений (довжина хвилі 500-560нм); кювету 10мм; проти холостий проби. Неодружена проба - Надосадова рідина в пробірці, що містить 1% розчин NaCl (пробірка № 1). На наступний день повторюють дослідження з инкубировались кров'ю, так як при деяких видах гемолітичних анемій зниження осмотичної резистентності еритроцитів виявляється тільки після інкубації.

 Розрахунок.

Відсоток гемолізу розраховують для пробірок № 2-13 (пробірка № 1 - неодружена проба, гемоліз у пробірці № 14 приймається за 100%). Розрахунок ведуть за формулою:  , де

Х - відсоток гемолізу досліджуваної проби;

Ех - Екстінція досліджуваної проби;

Е14 - Екстінція надосадової рідини в пробірці з 0,1% NaCl (пробірка № 14);

100 - відсоток гемолізу в пробірці № 14.

Нормальні величини. У свіжої крові початок гемолізу відзначається при концентрації хлориду натрію 0,5-0,45%, а повний гемоліз - при 0,4-0,35%.

Клініко-діагностичне значення. Дослідження осмотичної резистентності еритроцитів проводять при підозрі на гемолітичну анемію. Зниження осмотичної резистентності еритроцитів, тобто поява гемолізу при більш високій, ніж у нормі, концентрації хлориду натрію (0,7-0,75%) характерно для спадкового микросфероцитоза. Підвищення осмотичної резистентності еритроцитів спостерігається при таласемії і гемоглобинопатиях.

4.9. Заключні Контрольні запитання ПО ТЕМІ «АНЕМІЇ»

Установіть відповідність між елементами в шпальтах. Одному елементу в лівому стовпчику відповідає тільки один елемент в правій колонці.

1. Види анемій і причини їх розвитку:

1) постгеморрагические а) пригнічення кровотворення

2) гипопластические б) посилений гемоліз еритроцитів

в) крововтрати

г) зміна структури глобіну.

2. Зміна окремих властивостей еритроцитів і терміни для їх позначення:

1) розміру а) пикноз

2) форми б) агранулоцитоз

3) кольору в) анізохромія

г) пойкилоцитоз

д) анизоцитоз.

3. Діаметр різних видів еритроцитів (мкм):

1) нормоцітов а) 2-3

2) макроцитів б) 5-6

3) мікроцітов в) 7-8

г) 9-12

д) 12-15.

4. Форма різних еритроцитів:

1) дрепаноцітов а) двояковогнутих дисків

2) сфероцітов б) мішеней

в) куль

г) серпів.

5. Різні види анемій і характерні для них форми еритроцитів:

1) серповидноклеточная а) акантоціти

2) таласемія б) дрепаноціти

в) мішеневідние еритроцити

г) мікросфероціти.

6. Включення в еритроцитах і методи забарвлення для їх виявлення:

1) тільця Жолли а) по Граму

2) тільця Гейнца б) за Романовським

3) негемоглобінового залізо в) суправітально забарвлення

г) реакція на берлінську блакить

д) метиленовим синім.

7. гематокритное величина в нормі (%):

1) у чоловіків а) 30-35

2) у жінок б) 36-42

в) 40-48

г) 50-55.

8. Форма зміни морфології еритроцитів при В12дефіцитної анемії:

1) анизоцитоз а) микросфероцитоз

2) анізохромія б) мегалоцітоза

в) гіперхромія

г) поліхроматофілія.

9. Різні види анемій і кількість ретикулоцитів при них (‰):

1) В12дефіцитна а) 0

2) таласемія б) 0,5-1,0

3) апластична в) 5-10

г) 5-12

д) 15-25.

10. Осмотична резистентність еритроцитів в нормі (концентрація NaCl,%):

1) початок гемолізу а) 0,25-0,3

2) кінець гемолізу б) 0,35-0,4

в) 0,45-0,5

г) 0,65-0,7.

глава 5

Лабораторні дослідження ПРИ променевої хвороби

Променева хвороба розвивається в результаті впливу іонізуючого опромінення. Залежно від тривалості опромінення розрізняють гостру і хронічну променеву хворобу.

5.1. на гостру променеву хворобу

Гостра променева хвороба (ГПХ) може бути результатом ядерного вибуху, порушення правил ТБ або помилки персоналу, що використовує джерела іонізуючого опромінення, аварії систем, що містять радіонукліди, застосування високих доз іонізуючого випромінювання з лікувальною метою, випадкового опромінення. Типова гостра променева хвороба виникає внаслідок короткочасного (від секунд до 3-х діб) загального зовнішнього опромінення або надходження всередину радіонуклідів, що створюють в тілі поглинену дозу більше 1 Грея.

Один Грей дорівнює поглиненої дози іонізуючого випромінювання, при якій речовини з масою в 1 кг передається енергія іонізуючого випромінювання, що дорівнює 1 Дж. У практиці поширена також позасистемна одиниця - рад. 1 Грей = 100 рад.

Основним патогенетичним механізмом гострої променевої хвороби є пошкодження іонізуючим випромінюванням високочутливих до нього тканин: кісткового мозку, епітелію шкіри і тонкого кишечника. Клітини кісткового мозку мають різною чутливістю до іонізуючої радіації. Найбільш чутливі до неї бластні клітини і лімфоцити, тому зниження рівня лімфоцитів в периферичної крові є ранньою ознакою гострого променевого ураження, за яким визначають передбачувану дозу отриманого опромінення.

Залежно від дози опромінення розвивається та чи інша форма гострої променевої хвороби.

При дозі 1-10 Грей розвивається костномозговая форма гострої променевої хвороби, при якій домінує ураження органів кровотворення. Провідним є гематологічний синдром. Залежно від дози опромінення і ступеня тяжкості захворювання костномозговая форма ГПХ може закінчитися повним одужанням, неповної ремісії або привести до смерті хворого. При всіх інших формах ОЛБ прогноз життя абсолютно несприятливий.

При дозі 10-20 Грей розвивається кишкова форма гострої променевої хвороби, для якої характерне ураження шлунково-кишкового тракту з відторгненням слизової оболонки тонкого кишечника, зневодненням організму і смертельними наслідками на 10-14 день.

При дозі 20-80 Грей розвивається токсична форма гострої променевої хвороби. На перший план виступає різка інтоксикація організму продуктами білкового розпаду - азотемія, судинна недостатність, прогресуюча цитопения. Смерть настає на 5-7 день хвороби.

При дозі більше 80-100 Грей розвивається церебральна форма гострої променевої хвороби з прогресуючим набряком мозку, порушенням регуляції дихання і кровообігу. Смерть настає від коми в перші години або дні після опромінення.

Перебіг кістковомозковою форми гострої променевої хвороби чітко ділиться на 4 фази.

I фаза (первинної реакції) триває від 1 до 3 діб, характеризується диспепсичними розладами (нудотою, блювотою) і порушенням гемодинаміки. В кістковому мозку вже в цей час починається загибель молодих клітинних елементів. У периферичної крові зменшується кількість лейкоцитів і, в першу чергу, лімфоцитів - розвивається абсолютна лімфоцитопенія, глибина якої залежить від отриманої дози опромінення.

II фаза (латентний період, або удаваного клінічного благополуччя) в залежності від дози опромінення триває від 10-15 днів до 4-5 тижнів. Характеризується загальним задовільним станом хворих при поступовому наростанні змін до радіочутливих тканинах - триває загибель молодих клітин в кістковому мозку, відбувається придушення сперматогенезу, починається ентерит, випадання волосся, ураження шкіри. У периферичної крові наростає лейкопенія, абсолютна лімфоцитопенія. Зменшується кількість тромбоцитів, ретикулоцитів, еритроцитів. У пунтате кісткового мозку виявляється пригнічення всіх трьох паростків кровотворення.

III фаза (виражених клінічних проявів, розпал хвороби) характеризується вкрай важким станом хворих, у яких спостерігається різке пригнічення імунітету з інфекційними ускладненнями, геморрагически-некротичні пневмонії, підвищення температури тіла до 40-41?С, виразково-некротичні ураження порожнини рота, глотки, шкіри, порушення свідомості, кровотечі, облисіння. У периферичної крові розвивається панцитопенія. Кількість лейкоцитів продовжує зменшуватися. При важких формах хвороби розвивається агранулоцитоз, пригнічення кровотворної функції кісткового мозку (гіпоплазія) змінюється його спустошенням (аплазією).

При дозах більше 2,5-3,0 Грей і несвоєчасному або нераціональному лікуванні в цей період можливий смертельний результат. У разі одужання до кінця III фази в кістковому мозку з'являються молоді клітинні форми. III фаза триває не більше 2-3 тижнів.

IV фаза (відновна) триває від 3-6 місяців до 1-2 років. Загальний стан хворих повільно поліпшується, температура тіла нормалізується, зникають геморагічні прояви, некротичні маси відриваються, еродовані поверхні гояться. З 2-5 місяці починається ріст волосся. Поступово відновлюється гемопоез - в кістковому мозку збільшується загальна кількість клітин, з'являються молоді клітини всіх трьох паростків. У периферичної крові зростає кількість еритроцитів, лейкоцитів, тромбоцитів, нормалізується ШОЕ.

Віддалені наслідки гострої променевої хвороби. Навіть якщо гостра променева хвороба закінчилася повним клінічним одужанням, у людей, які перенесли її, згодом можуть розвинутися катаракта, нестійка і неглибока лейкопенія, гранулоцитопенія, тромбоцитопенія, зниження здатності до дітородіння, запліднення, пухлини, лейкози.


5.2. хронічної променевої хвороби

Хронічна променева хвороба (ХЛБ) - це складний клінічний синдром, що розвивається при тривалому променевому впливі невеликими дозами опромінення, коли сумарна доза перевищує 1 Грей. Хронічна променева хвороба характеризується змінами в різних органах і системах, а також тривалістю і хвилеподібно перебігу. При цьому спостерігається порушення нейросудинної регуляції, хронічна недостатність периферичного кровообігу, зниження артеріального тиску, зміна структури капілярів, пригнічення секреції шлунково-кишкового тракту (зниження кислотності шлункового соку, зменшення активності ферментів травних соків), в крові спостерігаються лейкопенія, нейтропенія, тромбоцитопенія, анемія.

Залежно від отриманої дози, термінів дії радіації, індивідуальної чутливості організму хронічна променева хвороба має три ступеня тяжкості: 1 (легка), 2 (середньої тяжкості) і 3 (важка).

При легкому ступені ХЛБ в периферичної крові та кістковому мозку мало змін. Анемії, як правило, не спостерігається. Кілька зменшений вміст ретикулоцитів. Відзначається тенденція до лейкопенії з нейтропенією і відносним лімфоцитозом, але кількість лейкоцитів не нижче 3,0 · 109/ Л. Кількість тромбоцитів незначно зменшено зі збільшенням кількості старих і нефункціонуючих тромбоцитів. В кістковому мозку кількість клітин зазвичай нормальне.

При другий (середнього) ступеня тяжкості ХЛБ відзначається помірна анемія і значна лейкопенія - до 1,5-2,5 · 109/ Л з різко вираженою гранулоцитопенією і відносним лімфоцитозом (абсолютна кількість лімфоцитів зменшена). Наростає тромбоцитопенія і ретикулоцитопенія. В кістковому мозку знижена кількість клітин.

При третьої (важкої) ступеня ХЛБ пригнічені всі паростки кровотворення. Порушується дозрівання клітин. Відзначається стійка лейкопенія (кількість лейкоцитів 1,0 · 109/ Л і менше) за рахунок нейтропенії, абсолютна лімфоцитопенія. Можливий розвиток агранулоцитозу. Рівень тромбоцитів знижений до 50 · 109/ Л і нижче. Еритроцитів менш 1,5-2,0 · 1012/ Л. В кістковому мозку різко знижено загальна кількість клітин. Розвивається гіпоплазія, а потім - аплазія (спустошення) кісткового мозку. Результат захворювання різний: може бути неповна клініко-гематологічна ремісія, летальний результат, розвиток хронічногомієлолейкозу або гострого лейкозу.

До віддалених наслідків хронічної променевої хвороби відносяться гипопластические стану кісткового мозку, лейкози, пухлини легень, печінки, рак шкіри, прискорена інволюція (старіння).

Контрольні питання по темі «Променева хвороба»

1. Причини розвитку гострої і хронічної променевої хвороби.

2. Які форми гострої променевої хвороби розвиваються при різних дозах опромінення?

3. Що таке радіочутливі тканини? Перерахуйте їх.

4. Який гематологічний показник є ранньою ознакою гострої променевої хвороби?

5. Які процеси відбуваються в кістковому мозку під впливом іонізуючої радіації?

6. Який прогноз для життя і здоров'я при гострої променевої хвороби?

7. Віддалені наслідки гострої променевої хвороби.

8. Який час потрібно для відновлення кровотворення після гострої променевої хвороби?

9. Які органи і системи уражаються при хронічної променевої хвороби?

10. Яка Регенераторна здатність кісткового мозку при хронічної променевої хвороби?

глава 6

Лейкоз

Лейкози, лейкемії [від грец. leukos білий] - це пухлинні клонових захворювання кровотворної системи, що розвиваються в кістковому мозку.

6.1. Етіологія, патогенез, КЛАСИФІКАЦІЯ Лейкоз

В основі лейкозів лежить соматическая мутація на рівні стовбурової полипотентной клітини і клітин-попередників II і III класів.

Причини виникнення лейкозів, незважаючи на численні дослідження, до теперішнього часу повністю не з'ясовані. Існують вірусна, хімічна, ендогенна (обмінна) і радіаційна теорія їх походження. Вірусна теорія припускає наявність в організмі латентних лейкозогенних вірусів, які під впливом різних факторів (хімічних речовин-канцерогенів, опромінення та ін.) Активуються, впроваджуються в ядро ??кровотворної клітини і змінюють її ДНК, перетворюючи в злоякісну. Істотну роль у виникненні лейкозів грають генетичні фактори.

Всі лейкози мають клонових [від грец. klon син] характер зростання, тобто походять від однієї клітини, що зазнала мутації. Первинний пухлинний клон якийсь час співіснує з нормальним клоном, але, володіючи перевагою в зрості, пухлинний клон призводить до скорочення обсягу нормального гемопоезу, заміні здорової кровотворної тканини на лейкозних тканину, витіснення нормальних паростків кровотворення. Вплив шкідливих факторів призводить до утворення лейкозного клону в середньому через 3,5 року (мінімально - через 1 рік; максимально - через 10 років).

Розрізняють гострі і хронічні лейкози. Розподіл лейкозів на гострі і хронічні є не клінічним, а Цитоморфологічне, т. Е. Відбиває ступінь анаплазії лейкозних клітин. анаплазія [Від лат. аna назад + plasis освіту] - стійка втрата клітинами специфічних властивостей з поверненням до більш примітивного будовою і функціями, втрата здатності утворювати специфічні структури і продукти.

Для лейкозів характерна пухлинна прогресія, Тобто наростання злоякісних властивостей. В основі цього процесу лежать багаторазові мутації в лейкозних клітинах. Нові клони клітин можуть виявитися нечутливими до лікарських препаратів, і протягом лейкозу стає важчим і прогресуючим. Хронічний лейкоз має тенденцію трансформуватися в гострий лейкоз за рахунок появи більш патологічних клонів клітин, що володіють властивостями «бластів». У той же час гострий лейкоз ніколи не переходить в будь-який варіант хронічного.

Матеріалом для вивчення кровотворної функції при лейкозі служать мазки периферичної крові, пунктати кісткового мозку, лімфатичних вузлів, селезінки, а також препарати, отримані в результаті трепанобиопсии клубової кістки. Сучасна лабораторна діагностика лейкозів включає в себе мікроскопічне дослідження забарвлених препаратів, цитохімічні дослідження, иммунофенотипирование клітин, складових субстрат пухлини, і їх цитогенетическое дослідження.

Розвиток лейкозів зазвичай супроводжується зміною якісного і кількісного складу лейкоцитів периферичної крові. На початкових стадіях захворювання пухлинні клітини в крові можуть бути відсутні (алейкемічна стадія), проте у міру прогресування пухлинного процесу вони з'являються спочатку в невеликій кількості (Сублейкемічні стадія), а потім, в розпал хвороби - у великому і дуже великій кількості, часто при збільшенні загального кількості лейкоцитів (лейкемическая стадія).

6.2. ГОСТРІ Лейкоз

Гострий лейкоз (ОЛ) - це пухлинне клонових захворювання кровотворної системи з первинним ураженням кісткового мозку, при якому субстрат пухлини становлять бластні клітини.

 




ТЕХНІКА ПІДРАХУНКУ лейкоцитарній формулі | Лейкоцитарна формула в нормі | ЗМІНА МОРФОЛОГІЇ ЛЕЙКОЦИТІВ ПРИ ПАТОЛОГІЇ | ЗМІНА КІЛЬКОСТІ ОКРЕМИХ ВИДІВ ЛЕЙКОЦИТІВ ПРИ ПАТОЛОГІЇ | Вікові зміни крові | Спадкові аномалії морфології лейкоцитів | Зміна крові при гнійно-запальних і інфекційних захворюваннях | АВТОМАТИЧНІ МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ КЛІТИН КРОВІ | СХЕМА Кровотворення | Зміна морфології клітин крові при дозріванні |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати