На головну

Визначення кількості білка в лікворі з сульфосалициловой кислотою

  1. B. Визначення прибутковості ОФЗ-ПК і ОГСЗ.
  2. II. Поняття частоти випадкової події. Статистичне визначення ймовірності.
  3. II.1.1. Визначення теоретичних і практичних завдань психології та педагогіки
  4. IV. ШВИДКА СИГНАЛИЗАЦИЯ І ТОЧНЕ ВИЗНАЧЕННЯ МІСЦЯ АВАРІЇ
  5. V. Визначення ймовірності і непевного простору.
  6. VI. Найпростіше «визначення», його призначення і структура
  7. А. Визначення курсової вартості середньострокової і довгострокової бескупонних облігацій.

Принцип. Сульфосаліцилова кислота викликає коагуляцію білка з утворенням каламутності, інтенсивність якої пропорційна концентрації білка.

Реактиви. 1. 6% розчин сульфосалициловой кислоти (СРК). 2. 14% розчин сульфату натрію (безводного). 3. Робочий розчин - готують перед вживанням шляхом змішування рівних об'ємів реактивів 1 і 2. 4. 0,9% розчин хлориду натрію. 5. 1% розчин альбуміну для побудови калібрувального графіка.

Спеціальне обладнання: Фотоелектроколориметр.

Хід дослідження. В пробірку (досвід) наливають 5мл свіжоприготованого робочого розчину і 0,5 мл ліквору. В іншу пробірку (контроль) наливають 5мл 0,9% розчину хлориду натрію і 0,5 мл ліквору. Ретельно перемішують вміст обох пробірок. Через 10 хвилин вимірюють інтенсивність помутніння на ФЕК при довжині хвилі 410-480нм (синьо-фіолетовий світлофільтр) в кюветі 10мм, проти вмісту контрольної пробірки. Розрахунок кількості білка ведуть за калібрувальним графіком.

Побудова калібрувального графіка. З каліброваного розчину готують розведення і обробляють їх як досвідчену пробу. У 5 пробірок наливають відповідно 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 і 1 мл розчину альбуміну і в кожну з них доливають 0,9% NaCl до об'єму 10мл. Концентрація білка в цих розчинах становить відповідно 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 і 1 г / л.

Білки спинномозкової рідини складаються з двох основних фракцій: альбумінів і глобулінів. Ставлення глобулиновой фракції до альбуміну коливається в межах 0,2-0,3 (2: 10-3: 10). При запальних захворюваннях відбувається збільшення кількості в основному крупнодисперсних білків-глобулінів, що і виявляється глобулиновой реакцією Нонні-Апельта.

Визначення глобулінів висолюванням (реакція Нонні-Апельта)

Принцип. Реакція заснована на властивості солей в певній концентрації (напівнасичення розчину сульфату амонію) осаджувати вибірково глобуліни.

реактив: насичений розчин сірчанокислого амонію. 85г солі розчиняють в 100мл води при кип'ятінні, отриманий розчин витримують 48 годин при кімнатній температурі і фільтрують. Реакція розчину нейтральна (рН 7,0-7,1).

Хід дослідження. В одну пробірку (досвід) вносять 0,5 мл ліквору і 0,5 мл насиченого розчину сульфату амонію, перемішують. Виходить напівнасичення розчин сірчанокислого амонію. В іншу пробірку (контроль) наливають 1 мл дистильованої води. Порівнюють прозорість вмісту дослідної і контрольної пробірок на чорному тлі.

оцінка результатів. Проба вважається позитивною, якщо помутніння в дослідній пробірці з'явиться протягом 3-х хвилин. Пізніше помутніння може статися і в нормальної спинномозковій рідині. Результати проби оцінюються за системою чотирьох плюсів так само, як проба Панді.

Реакція дозволяє відрізнити нормальний вміст глобулінів в лікворі від патологічно збільшеного. Більш достовірну уяву про зміст глобулінів і їх фракцій дає електрофорез білків ліквору.

Глюкоза. У нормі Зміст глюкози в лікворі складає 2,7-4,4 ммоль / л. Для визначення глюкози в лікворі використовують ті ж методи, що і для глюкози крові (найчастіше глюкозооксидазний, ортотолуїдинового, за допомогою смужок ФАН).

Хлориди.У нормі вміст хлоридів в ЦСР становить 118-132 ммоль / л. При менінгітах (як туберкульозних, так і гнійних) кількість глюкози і хлоридів в ЦСР падає.

 




Мікроскопічне дослідження калу | ЗАЛИШКИ БІЛКОВОЇ ЇЖІ В КАЛЕ | ЗАЛИШКИ вуглеводної їжі В КАЛЕ | ЗАЛИШКИ ЖИРІВ У КАЛЕ | МІКРОФЛОРА | копрологіческого СИНДРОМИ | ОСВІТА, ФУНКЦІЇ ТА ОТРИМАННЯ ліквору | Фізичні властивості | Мікроскопічне дослідження ліквору | Диференціація клітинних елементів в лічильної камері |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати