На головну

Виділення і індикація вірусів на РКЕ.

· виявлення вірусів на хоріон-аллантоісной оболонці РКЕ, зараженого вірусом герпесу (Мікроскопія мазків-відбитків, забарвлених за Романовським-Гімза - демонстрація));

· виявлення вірусу грипу в аллантоісной рідини зараженого РКЕ за допомогою реакції гемаглютинації (РГА) з еритроцитами курей. Курячі ембріони розкривають, аллантоісную рідина відсмоктують пастерівської піпеткою, титруючи її в лунках пластикового планшета в розведеннях від 1:10 до 1: 512 в обсязі 0,5 мл. У кожну лунку додають 0,5 мл 1% суспензії еритроцитів курей, витримують при кімнатній температурі протягом 40 хвилин, після чого виробляють облік. Контролями служать незаражених аллантоісная рідина і фізіологічний розчин. Наявність гемаглютинації в досвіді при відсутності її в контролях вказує на наявність вірусу в досліджуваній рідині.

4. Ідентифікація вірусів:

· виявлення типу вірусу грипу в хоріон-аллантоісной рідини РКЕ за допомогою РГГА. (Нейтралізація гемагглютинирующей активності різних типів вірусу грипу А, В, С відповідними протигрипозними діагностичними сироватками). Відсутність гемаглютинації з однією з протигрипозних сироваток вказує на тип вірусу грипу;

· виявлення вірусів за допомогою реакції преципітації в гелі (демонстрація). В одну з лунок в агарових гелі вносять досліджуваний матеріал від хворого, а в іншу - діагностичну сироватку, що містить відповідні антитіла. У місці зустрічі вірусу і антитіла формується преципітат у вигляді білих ліній;

· реакція нейтралізації (демонстрація). Проводять зараження РКЕ, культур клітин або експериментальних тварин (в залежності від властивостей вірусу) сумішшю віруссодержащего матеріалу (матеріал від хворого, хоріон-аллантоісная рідина РКЕ, Надосадова рідина зараженої культури тканини) і відповідних діагностичних противірусних сироваток. В якості контролю використовується біологічний об'єкт (РКЕ, культура тканини, експериментальна тварина), заражений тільки вируссодержащим матеріалом. Контрольне тварина, в організмі якого вірус не нейтралізується антитілами сироватки, гине. Дослідне тварина виживає, тому що антитіла сироватки нейтралізують вірус.

5. Серологічний метод діагностики вірусних інфекцій (Виявлення антитіл в сироватці крові хворих - ретроспективна діагностика)

· РСК при аденовірусної інфекції. Ставиться з метою визначення антитіл і їх титру в сироватці крові хворих на 2 і 8 день хвороби.

· кольорова проба при поліомієліті (демонстрація). Суть реакції полягає в зміні кольору середовища, на якій культивується культура тканини, в результаті виділення кислих продуктів метаболізму, що призводить до зміни вихідного червоного кольору індикатора середовища (феноловий червоний) на жовтий. У заражених вірусом клітин виділення метаболітів не відбувається, тому зміни кольору середовища не відбувається. Схема досвіду: до різних разведениям досліджуваної сироватки додано 0,1 мл вакцинного штаму вірусу поліомієліту, суміш внесена в пробірки з культурою тканини. Після 8-10-денний інкубації в термостаті проводять облік реакції по найбільшому розведенню сироватки, при якому спостерігається зміна кольору середовища з червоного на жовтий.

· РНГА (демонстрація) - Визначення антитіл до вірусу гепатиту В.

· PТГA (демонстрація) - Визначення антитіл в сироватці крові хворого на кліщовий енцефаліт. Реакція заснована на здатності деяких вірусів склеювати еритроцити птахів, морських свинок, I (0) групи крові людини. До відомого гемагглютинирующих вірусу додають досліджувану сироватку крові. Якщо в досліджуваній крові містяться антитіла, вони нейтралізують гемагглютинирующих активність вірусу і аглютинації вірусів не настає. Схема досвіду: до різних розведень сироватки крові хворого додають антиген вірусу кліщового енцефаліту і суспензія еритроцитів. Після експозиції протягом 40 хв проводять облік реакції по найбільшому розведенню сироватки крові хворого, який викликав гальмування аглютинації еритроцитів.

· ІФА (демонстрація) - Визначення антитіл до ВІЛ.

Тема 14. ВІРУСИ - ЗБУДНИКИ ГРИПУ І ГРВІ. Параміксовірус - ЗБУДНИКИ КОРУ І епідемічного паротиту. Вірусом, що змінює шкіру та слизові оболонки (поксвирусов, герпесвіруси). коронавірус



Самостійна робота студентів | Вірусологічна діагностика гострих респіраторних вірусних інфекцій та грипу

Лабораторна діагностика епідемічного висипного тифу. | Лабораторна діагностика Ку-лихоманка. | Лабораторна діагностика ерліхіозом | Лабораторна діагностика бартонеллезов | Самостійна робота студентів | Виділення вірусів на культурах клітин | Експрес-діагностика вірусних інфекцій | Вивчення морфології вірусів по електронограмі. | індикація вірусів | Серологічний метод діагностики вірусних інфекцій |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати