На головну

Вивчення морфології вірусів по електронограмі.

2. Освоєння методів обробки матеріалів для вірусологічного дослідження, взятих від хворих (носоглоткові змиви, випорожнення і т.д.). Обов'язковими етапами цієї обробки є емульгування матеріалу в розчині Хенкса з наступним центрифугуванням, відсмоктування надосадової рідини і додаванням до неї різних антибіотиків (пеніцилін, стрептоміцин, ністатин) для пригнічення супутньої мікрофлори.

3. Освоєння етапів приготування первинно-трипсінізірована культури тканини. Вивчити етапи приготування одношарової. трипсінізірована культури клітин фібробластів людини. Шматочки ембріональної тканини подрібнити ножицями, пропіпетіровать в розчині Хенкса, помістити в пробірку, профільтрувати. До осадку додати розчин Хенкса з трипсином. Перемішати осіли дезагреговані клітини, перенести на предметне скло, вивчити морфологію живих клітин в препараті "роздавлена ??крапля", подсчітатьіх кількість в камері Горяєва і внести в пробірку з середовищем 199 для отримання моношару клітин. Пробірки поміщаються в термостат при 370 З на добу для вирощування.

Вивчення клітинних культур проводиться мікроскопічним методом. Для цього пробірка поміщається на предметний столик мікроскопа; моношар клітин повинен бути повернутий догори. Мікроскопія проводиться з увігнутим дзеркалом під малим збільшенням мікроскопа, конденсор опускається вниз. У пробірці видно суцільний зростання одноядерннх клітин у вигляді одного шару.

4. Освоєння методів культивування вірусів на курячих ембріонах (РКЕ)- Зараження РКЕ в амніотичну, аллантоісную порожнини, на хоріон-Алантоїс оболонку.

Зараження в хоріон-аллантоісную порожнину. Над зазначеним при овоскопії повітряним мішком виробляють обробку шкаралупи спиртом, водою, потім знову спиртом. При закритому способі зараження в аллантоісную порожнину в шкаралупі над повітряним мішком роблять отвір стерильною голкою. У нього вводять голку шприца, при цьому проколюється хоріон-аллантоісная оболонка і голка занурюється в аллантоісную порожнину на I - 2 мм (від поверхні шкаралупи відстань близько 1,5 см), після чого вводять 0,2 мл досліджуваного матеріалу. Отвір в шкаралуп'яну оболонці закривають стерильним парафіном.

Зараження на хоріон-аллантоісную оболонку. Після дезінфекції шкаралупи остання відрізається по краю повітряного мішка, дно якого вистелено білою шкірястою подскорлупной оболонкою. Її видаляють стерильним пінцетом, дотримуючись обережності, тому що під нею розташована прозора, волога, з розвиненими судинами хоріон-аллантоісная оболонка, на яку наносять досліджуваний матеріал. Дефект в шкаралупі закривають скляним ковпачком або платівкою, краї яких попередньо занурюються в розплавлений парафін.

Після зараження обома способами ембріон маркують і поміщають в термостат.

5. Експрес-діагностика вірусних інфекцій (Виявлення вірусу або його компонентів в клінічному матеріалі, взятому від хворого - демонстрація).

· Дослідження мазків-відбитків з метою виявлення внутрішньоклітинних включень. Мікроскопія мазків-відбитків з поверхні герпетичних виразок (забарвлення за Романовським-Гімза). Звернути увагу на наявність гігантських багатоядерних клітин з внутрішньоклітинними включеннями.

· Дослідження мазків-відбитків зі слизової оболонки верхніх дихальних шляхів у хворого на грип імунофлюоресцентним методом. Звернути увагу на світяться частки, які містяться всередині клітин.

· Виявлення антигенів вірусу герпесу в клінічному матеріалі твердофазним імуноферментним методом.

· Молекулярна гібридизація (виявлення вірусів, що не розмножуються в культурі клітин або персистуючих вірусів - цитомегаловірус, герпес-вірусів, ентеровірусів, ро-тавірусов і т.д.). Реакція заснована на гібридизації комплементарних ниток вірусів з формуванням двунитчатую структур. Наявність комплементарних ниток виявляють за допомогою зондів, якими є ДНК і РНК, мічені ферментом. При додавання субстрату до зонду з ферментом відбувається кольорова реакція.

Тема 13. ЗАГАЛЬНА вірусології: ДІАГНОСТИКА ВІРУСНИХ ІНФЕКЦІЙ. Вірусологічні методи дослідження. ІНДИКАЦІЯ І ІДЕНТИФІКАЦІЯ ВИРУСОВ. Серологічні методи діагностики ВІРУСНИХ ІНФЕКЦІЙ.



Експрес-діагностика вірусних інфекцій | індикація вірусів

Лабораторна діагностика урогенітального мікоплазмозу | Лабораторна діагностика урогенітального хламідіозу | Лабораторна діагностика бактеріального вагінозу | Лабораторна діагностика рикетсіозів | Лабораторна діагностика епідемічного висипного тифу. | Лабораторна діагностика Ку-лихоманка. | Лабораторна діагностика ерліхіозом | Лабораторна діагностика бартонеллезов | Самостійна робота студентів | Виділення вірусів на культурах клітин |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати