На головну

Лабораторна діагностика иерсиниозов

ентеропатогенні иерсинии (Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis) викликають кишкові інфекції, які характеризуються ураженням лімфоїдного апарату кишечнику, токсико-алергічними ускладненнями, розвитком генералізованих процесів.

Лабораторна діагностика иерсиниозов включає бактеріологічне і серологічне дослідження.

Бактеріологічне дослідження.Матеріал, який підлягає дослідженню (фекалії, кишкові біоптати, лімфовузли або тканину віддаленого апендикса, кров, слиз із ротоглотки), обробляють протягом 1 хвилини 0,5% розчином гідроксиду калію в 0,5% хлориде натрію, потім роблять посіви на агар CIN, Сєрова або середу Ендо, які після посіву інкубують при 32 ° С протягом 24-48 год або 24 год при 370 З і стільки ж при кімнатній температурі. Паралельно посіви поміщають в холодильник при температурі +40 З (иерсинии добре ростуть при низьких температурах). Пересівання з середи накопичення виконують на 3, 5, 10, 15-а доба на зазначені вище поживні середовища.

На 2-й (3-й) день вивчають первинні посіви. Ентеропатогенні иерсинии утворюють більш дрібні колонії, ніж інші ентеробактерії, на середовищі CIN колонії мають червоний центр і безбарвну периферію ( «бичаче око»), на середовищі Ендо колонії безбарвні або з більш інтенсивно забарвленим центром. У Y. enterocolitica и у Y. pseudotuberculosis часто спостерігається дисоціація колоній з переходом в R (шорсткі) форми. Характерні для иерсиний колонії пересівають для накопичення чистої культури на скошений МПА або на середу Ресселя або Олькеницкого.

На 3-й (4-й) день проводять ідентифікацію чистої культури за біохімічними і антигенними властивостями (біовар, серогрупи за допомогою РА у культур, вирощених при температурі нижче 300 С), враховують температуру фізіологічного оптимуму иерсиний (28-300 С), визначають чутливість до антибіотиків. Збудники ієрсиніозу та псевдотуберкульозу оксідазоотріцательни, ферментують до кислоти глюкозу, мають нитратредуктаза і іншими властивостями (див. Табл. 5).

На відміну від збудника псевдотуберкульозу, бактерії виду Y. enterocolitica за біологічними властивостями гетерогенні, включаючи безумовно-патогенні, умовно-патогенні (збудники опортуністичної інфекції або харчового отруєння) і непатогенні для людини иерсинии. Визначення факторів вірулентності у Y. enterocolitica передбачає постановку реакцій аутоагглютінаціі і кальційзалежних, піразінамідазного тесту, визначення плазмідассоціірованних антигенів.

Тест аутоагглютінаціі.У дві пробірки з середовищем Кларка засівають досліджуваний штам, інкубують протягом 24 год одну пробірку при 370 З, іншу - при 26 - 280 С. При наявності вірулентності бактерії, вирощені при температурі 370 З, склеюються у вигляді пластівців, які осідають на дно і стінки пробірки. Культура, інкубували при температурі 26 - 280 С, не аглютинується.

Визначення піразінамідазной активності.На скошену середу з пиразинамидом, засівають досліджувані культури, вирощені при температурі 25-300 З на ПА, інкубують при тій же температурі протягом 48 годин, після чого змочують скошену поверхню розчином сульфату амонійного заліза, залишаючи пробірку при кімнатній температурі протягом 15 хв. У пробірках з культурами патогенних иерсиний колір середовища залишаються без змін; непатогенні иерсинии змінюють колір скошеної частини середовища на коричневий.

тест кальційзалежних ставлять на кальцій-дефіцитному агарі, який готують шляхом додавання розчину оксалату натрію до розплавленого МПА. Після перемішування вносять 4 мл 0,5 М розчину хлориду магнію. Досліджувану культуру засівають на 2 чашки з кальцій-дефіцитних агаром, одну чашку інкубують 24 - 48 годин при 370 З, іншу - при 26 - 280 С. При наявності вірулентності при дефіциті кальцію у клітин, інкубованих при 37 ° С (але не 26 - 280 С), припиняється ріст бактерій, при цьому колонії на чашці або мають карликові розміри (Y. enterocolitica), Або відсутні зовсім (частіше у Y. pseudotuberculosis). При 26 - 280 З так само, як у непатогенних иерсинии при двох температурних режимах, спостерігається зростання колоній звичайних розмірів.

серологічне дослідженняполягає в постановці РА, РНГА або ІФА з іерсініозной діагностикумами і парними сироватками крові хворих з підозрою на ієрсиніоз з метою визначення специфічних антитіл.

генодіагностика - виявлення типових фрагментів ДНК патогенних иерсиний в клінічному матеріалі або харчових продуктах методами ДНК-ДНК-гібридизація або ПЛР-аналізу.



Самостійна робота студентів | Лабораторна діагностика кампилобактериозе

Самостійна робота студентів | Лабораторна діагностика лептоспірозу | Лабораторна діагностика боррелиозов (поворотні тифи, хвороба Лайма) | Лабораторна діагностика лістеріозу | Педіатричні аспекти теми | Ознайомитися зі схемою лабораторної діагностики черевного тифу і паратифів | Вивчити основні етапи бактеріологічного методу дослідження черевного тифу. | Серологічний метод діагностики тифо-паратіфозних захворювань. | Лабораторна діагностика сальмонельозів | Лабораторна діагностика ешеріхіозов |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати