На головну

Лабораторна діагностика ешеріхіозов

серед видів Escherichia coli сімейства Enterobacteriaceae, поряд з непатогенних кишковими паличками - представниками нормальної мікрофлори кишечника, є їх патогенні варіанти, в тому числі:

· Ентерогеморрагіческіе кишкові палички (ЕГКП) - збудники ентерогеморрагіческого ешеріхіоза з гемолітико-уремічний синдром);

· Ентероінвазівние (ЕІКП), що викликають захворювання, подібні з дизентерією;

· Ентеротоксигенні (ЕТКП), що викликають холероподібний ешеріхиоз або діарею мандрівників;

· ЕПКП (ентеропатогенні) - збудники дитячих коліентеритів та інших кишкових інфекцій, а також уропатогенние ешерихії, що вражають сечовивідні шляхи.

Найбільш часто зустрічаються серовар патогенних ешерихій, що входять до складу перерахованих груп, представлені в таблиці 11.

Таблиця 11.Серовар найбільш часто зустрічаються патогенних ешерихій.

 ентеротоксігенние  ентеропатогенні  ентероінвазівние  ентерогеморрагіческіе
 ПРО6, О8, О15, О20, О25, О27, О63, О78, О80, О85, О115, О128, О139, О148, О153, О159, О168  О18, О44, О55, О111, О112, О114, О119, О125-128, О142  О28, О29, О124, О136, О143, О144, О152, О164, О167  О157, О126, О111

Частина ешерихій відноситься до умовно-патогенних мікроорганізмів, здатних викликати опортуністичні інфекції (пневмонії, нагноєння ран і порожнин, менінгіти, сепсис і т.д.). При накопиченні в харчових продуктах ешерихії можуть стати причиною харчового отруєння. Методи мікробіологічної діагностики ешеріхіозов відображені в схемі 11.

бактериоскопический метод в діагностиці ешеріхіозов в практиці бактеріологічних лабораторій не застосовується через схожість морфологічних ітинкторіальних властивостей патогенних і умовно-патогенних ентеробактерій.

бактеріологічний методє основним методом діагностики ешеріхіозов. Для виділення ешерихій використовують середовища Ендо, Левіна та середу Мак-Конки з сорбітом для виділення Escherichia coli 0157: HI з групи ЕГКП.

 Схема 11.Лабораторна діагностика ешеріхіозов

 Експрес-методи (індікаціяпатогенной E.coli або її продуктів в досліджуваному матеріалі) ДНК-зонди або ПЛР для виявлення специфічного фрагмента ДНК патогенної E.coliРІФ


Через 18 -24 год інкубації при 370 З вивчають характер колоній (гладкі, опуклі, з рівними краями колонії, забарвлені в червоний колір в результаті розкладання лактози, з характерним металевим блиском), які виросли на щільних поживних середовищах. Патогенні ешерихії за морфологічними, тинкторіальними, культуральними та біохімічними властивостями не відрізняються від звичайних ешерихій, що мешкають в кишечнику людини. Виняток становлять лактозоотріцательние ЕПКП. Належність виділених мікроорганізмів до патогенних ешерихій встановлюють за антигенною структурою за допомогою ОРА з сумішшю специфічних ешеріхіозной ОК сироваток і вмісту 10 лактозопозитивних колоній. На середовищі Мак-Конки з сорбітом ЕГКП утворюють безбарвні колонії, тоді як інші ешерихії ферментують сорбіт, утворюючи червоні колонії.

При позитивному результаті РА решту колонії пересівають уколом в стовпчик і штрихом на поверхню скошеної частини середовища на комбіновану полускошенную поліуглеводную середу (наприклад, Ресселя) з метою накопичення культури.

На 3-й день враховують зміни на середовищі Ресселя. Ферментацію глюкози з утворенням кислоти або кислоти і газу виявляють щодо змін стовпчика агару (пожовтіння і його розриви середовища в результаті ферментації глюкози в анаеробних умовах) і скошеної частини (пожовтіння в результаті ферментації лактози і сахарози). При відсутності ферментації вуглеводів середу набуває лужну реакцію за рахунок виділення амінів при розкладанні білка і набуває червоного кольору. Перевіряють чистоту виділеної культури, визначають її біохімічні властивості (посів на середовища Гіссен); проводять серотіпірованіе шляхом постановки спочатку орієнтовною РА на склі з полівалентною ОК-сироваткою, а потім - розгорнутої РА з адсорбованими груповими сироватками для визначення ОК-серогрупи. Можна використовувати латексні діагностикуми, покриті відповідними антитілами (реакція латексної аглютинації).

Антигенну формулу виділеної культури визначають за результатами постановки розгорнутої РА з ОК сироваткою (або діагностичним імуноглобуліном) і живою культурою (типування по К-антигену), а також розгорнутої РА з ОК сироваткою і гріти (кип'яченою протягом 1-2 ч) культурою з метою визначення специфічного О-антигену. Кип'ятіння або автоклавирование руйнує поверхнево розташований К-антиген, який заважає визначенню специфічного О-антигену. Через добу інкубації при 370 З гомологічні сироватці штами повинні агглютинироваться до титру або до половини титру сироватки.

Культуру, позитивно прореагували в розгорнутій РА з однією з сироваток, засівають на диференційно-діагностичні середовища для остаточної ідентифікації. Для виявлення джерела інфекції та шляхів зараження у виділеного штаму визначають фаговар і коліціногеновар.

У виділених культур або в патологічному матеріалі можна визначити адгезивность і інвазивність мікроскопічним методом з використанням культур тканини Нер-2 або HeLa, а також плазміди вірулентності за допомогою ДНК-зондів або ПЛР.

Для прискореної ідентифікації збудника в досліджуваному матеріалі застосовують прямий або непрямий РИФ.

серологічний метод є допоміжним, спрямованим на виявлення антитіл і їх динаміки в процесі інфекції (дослідження парних сироваток) за допомогою РА, РНГА, ІФА.



Лабораторна діагностика сальмонельозів | Самостійна робота студентів

Самостійна робота студентів | Лабораторна діагностика бруцельозу | Самостійна робота студентів | Лабораторна діагностика лептоспірозу | Лабораторна діагностика боррелиозов (поворотні тифи, хвороба Лайма) | Лабораторна діагностика лістеріозу | Педіатричні аспекти теми | Ознайомитися зі схемою лабораторної діагностики черевного тифу і паратифів | Вивчити основні етапи бактеріологічного методу дослідження черевного тифу. | Серологічний метод діагностики тифо-паратіфозних захворювань. |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати