На головну

Лабораторна діагностика стрептококових інфекцій.

Лабораторна діагностика стрептококових інфекцій відображена в схемі 2. Виконуються наступні методи дослідження.

бактериоскопический метод- Виявлення в мазку з гною патогенних коків, що розташовуються у вигляді невеликих ланцюжків. Типове розташування у вигляді ланцюжків характерно для чистих культур стрептокока (рис. 2 кольорова вкладка).

а б
 Мал. 2. Стрептокок (Streptococcus pyogenes). а -мазок з досліджуваного матеріалу, б - мазок з чистої культури. Забарвлення по Граму. Коки, розташовані у вигляді ланцюжків. х900
 Схема 2. Лабораторна діагностика стрептококових інфекцій
 Матеріал: гній, ранові відокремлюване, пунктати з порожнин і абсцесів, кров, харкотиння, сеча, ліквор, блювотні маси, випорожнення, залишки їжі.
 Мікроскопічний метод.Виявленіе грампозитивнихкоків у вигляді ланцюжків в мазках з матеріалу від больного.Бактеріологіческій метод.1. день. Посів матеріалу на чашки кров'яним МПА, пробірки або флакони з цукровим МПБ.2 день -облік характеру росту колоній (на кров'яному МПА - зони гемолізу, в МПБ рівномірне помутніння). В мазку з колоній в забарвленні по Граму - коки у вигляді ланцюжків. Частину колонії пересівають на скошений МПА для отримання чистої культури. Пересівши з цукрового МПБ на кров'яний МПА  3 день - ідентифікація виділеної культури стрептокока, диференціація основних видів, визначення чутливості до антибіотиків. Виділення чистої культури з кров'яного МПА.4 день. Висновок про вид стрептокока. Ідентифікація культури, виділеної з цукрового МПБ5 день. Висновок про вид стрептокока, виділеного з цукрового МПБ. серологічний методРеакція нейтралізації (РН) для визначення антистрептолизина-О (гемолизина) і антігіалуронідази в сироватці крові хворих стрептококовими інфекціями.

Бактеріологічний метод.Досліджуваний матеріал засівають на кров'яний МПА в чашках Петрі. Після вирощування в термостаті при 370 З протягом доби враховують характер росту колоній (колонії дуже дрібні, завбільшки з шпилькову головку, круглі, мутнуваті, матові). Слизові колонії типові для свежевиделенних штамів, стрептокока, матові - для вірулентних стрептококів з високим вмістом М-протеїну, блискучі - для невірулентних штамів. На кров'яному МПА стрептококи викликають ?-гемоліз (зеленувата зона навколо колоній) або ?-гемоліз (повністю прозора зона гемолізу). Негемолітична стрептококи зазвичай непатогенних. З типових для стрептокока колоній готують мазок в забарвленні по Граму і після мікроскопії (Streptococcus pyogenes забарвлюється за Грамом позитивно, розташовується у вигляді ланцюжків) роблять пересів в пробірки з цукровим МПБ і кров'яним МПА. На 3 день враховують характер росту (на цукровому МПБ зростання стрептокока у вигляді придонно-пристінкового осаду, сама середовище прозоре), готують мазок в забарвленні по Граму і проводять ідентифікацію виділеної культури стрептокока за антигенними властивостями. Серогрупу стрептококів визначають в реакціях преципітації, латекс-аглютинації або коагглютинации з метою виявлення группоспецифических полисахаридного антигену А, використовуючи групоспецифічні сироватки (зазвичай груп A, B, C, F, G). Більшість патогенних для людини стрептококів є ?-гемолітичними і відносяться до групи A. серовар виділеної культури стрептокока виявляють за допомогою реакції аглютинації (виявлення типового протеїнового антигену М, за яким виділяють близько 100 сероварів) з типоспецифічними стрептококовими сироватками.

Для ідентифікації ?-гемолітичних стрептококів застосовують PYR-тест (на пірролідоніламідопептідазу), CAMP-тест (на білок синергидного гемолізу), тест Фогес-Проскауера (на освіту ацетоина), чутливість до бацитрацину (0,04 ОД на диск), галотолерантность (зростання в присутності 6,5% хлориду натрію), гідроліз гіппурат натрію, ферментацію трегалози, сорбіту та т. Д. ? -гемолитический стрептококи ідентифікують, використовуючи тести на чутливість до жовчі, оптохіну, на гідроліз ескуліну і т. Д. (табл. 3 ).

PYR -mecm. У МПБ, що містить 0,01% L-пірролідоніл- ? -нафтиламина, вносять петлю агарної культури стрептокока, інкубують при 370 З протягом 4 ч. Позитивна реакція характеризується появою яскраво-червоного забарвлення після внесення 1 краплі спеціального реактиву.

САМР-тест.S. agalactiae виробляють позаклітинний протеїн синергидного гемолізу, підсилює лізис еритроцитів ? -лізіном стафілокока. Для його визначення на чашку з кров'яним МПА засівають перпендикулярними штрихами досліджувану культуру стрептокока і добову бульонную культуру стандартного ? -гемолітичного штаму Staphylococcus aureus. Як позитивного і негативного контролів засівають відповідно культури S. agalactiae и S. pyogenes, інкубація 18 год при 37°С. При позитивному САМР-тесті на місці перетину стафілокока і S. agalactiae з'являється зона посилення гемолізу у вигляді «крила метелика».

Таблиця 3.Диференціальні ознаки стрептококів

 властивості  мікроорганізми
 S. pyogenes  S. agalactiae  Стрептококкігрупп C і G  S. bovis
 вид гемолізу ?  ?, ? ?  ?,
 Гідроліз гіппурат натрію - + - -
 CAMP-тест - + - -
 PYR-тест + - - -
 Жовчно-ескуліновий тест - - - +
 Зростання в сольовому МПБ - + - -
 Чутливість до бацитрацину + - - -
 Чутливість ксульфаметоксазолу і триметоприму - - + +

позначення:(+) - Постійна ознака, (-) - відсутність ознаки

Дослідження крові.Для виділення гемокультури посів зазвичай виробляють в цукровий бульйон. При наявності стрептокока на дні флакона з'являється пластівчастий придонний осад, а в мазках виявляються довгі ланцюжки стрептококів. Для виділення чистої культури і визначення характеру гемолізу роблять пересів в чашку з кров'яним агаром. Через добу (3-й день дослідження) з'являються типові дрібні колонії, оточені зоною гемолізу. Подальший хід дослідження аналогічний описаному вище.

генодіагностика. Розроблено метод ДНК-ДНК-гібридизації для виявлення специфічних фрагментів ДНК стрептокока в досліджуваному матеріалі, що дає підставу поставити попередній діагноз стрептококової інфекції.

Серодиагностика(Визначення антитіл до гемолизинам - стрептолізин-О) проводиться при підозрі на ревматизм. Суть реакції полягає в нейтралізації антитілами сироватки крові хворого гемолітичної активності стрептококкового стрептолізин-О. Титр антистрептолизина-О у здорових людей - до 250 АЕStO. При ревматизмі з перших днів хвороби титр антистрептолизина-О становить 500 АЕStO і вище.



Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів

Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів | Г. іммуногістологіческоеультраструктурному дослідження. | Вакцини і анатоксини | Сироватки та імуноглобуліни. | А Л Л Е Р Г Е Н И | Тема 17. Вчення ПРО ІНФЕКЦІЇ І імунітету. ПРАКТИЧНІ АСПЕКТИ ІМУНОЛОГІЇ. Контрольне заняття (тестовий контроль і усна співбесіда) | Методи виявлення збудника інфекції в матеріалі від хворого | досліджень | Лабораторна діагностика стафілококових інфекцій |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати