На головну

Лабораторна діагностика стафілококових інфекцій

Методи мікробіологічної діагностики стафілококових захворювань відображені в схемі 1. Виконується наступний комплекс методів дослідження.

бактериоскопический метод - Мікроскопія мазків з матеріалу від хворого, забарвлених по Граму. Виявлення в мазках коків, що розташовуються невеликими групами по 2-3 бактерії; типове розташування у вигляді грон винограду характерно для чистих культур стафілокока (рис. 1 - кольорова вкладка).

Бактеріологічний метод.Ісследуемийматеріал засівають на чашки з желточно-сольовим (ЖСА) і кров'яним МПА, інкубують при 370З добу. На 2 день враховують характер

зростання колоній на обох середовищах. На желточно-сольовому агарі колонії стафілокока мають рівні краї, гладку поверхню, навколо колонії утворюється райдужний віночок в результаті розщеплення лецитину яєчного жовтка ферментом лецітовітеллазой; колір пігменту колоній варіює від золотистого до білого. На кров'яному МПА навколо колоній утворюються зони

гемолізу. З типових для стафілокока колоній роблять мазок, фарбують його за Грамом, мікроскопують. Частину колонії пересівають на скошений МПА для отримання чистої культури. На 3 день проводять ідентифікацію виділеної культури стафілокока з диференціацією основних видів відповідно до таблиці 2, визначають чутливість до антибіотиків методом паперових дисків і фаговар (набір для фаготипирования складається з фагів 21 типу, розділених на 4 групи; при внутрішньолікарняних інфекцій найбільш часто зустрічаються фаговари 77 і 80).

Таблиця 1.Етіологія бактеріальних ранових і гнійно-запальних інфекцій

 аероби  анаероби
 грампозитивні бактеріїEnterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Erysipelotrix rhusiopathiaeграмнегативнібактеріїBurkholderia cepacia, Citrobacter koseri, Edwardsiella tarda, Eikenella corrodens, Enterobacter spp, Escherichia coli, Haemophylus influence, Klebsiella spp, Listeria monocytogenes, Moraxella catarrhalis, Proteus spp, Pseudomonas spp, Salmonella enterica, Serratia spp, Spirillum minus, Streptobacillus moniliformis, Vibrio vulnificus  Неспороутворюючих грампозитивні бактеріїBacteroides spp, Prevotella spp, Porphiromonas spp, Fusobacterium spp, Veilonella sppНеспороутворюючих грамнегативні бактерііPeptostreptococcus spp, Propionibacterium sppCпорообразующіе грампозитивні бактерііClostridium perfringens, Clostridium novy, Clostridium oedematiens, Clostridium septicum, Clostridium sordelli, Clostridium histolyticum, Clostridium sporogenes, Clostridium ramosum
 Схема 1. Лабораторна діагностика стафілококових інфекцій
 Матеріал: гній, ранові відокремлюване, пунктати з порожнин і абсцесів, кров, харкотиння, сеча, ліквор, блювотні маси, випорожнення, залишки їжі.
 Мікроскопічний методВиявленіе грампозитивнихкоків (групами по 2-3 клітини) в мазках з матеріалу від хворого, забарвлених по ГрамуСерологіческій методРНГА або РН для визначення ?-антитоксина в сироватці крові хворих на хронічні стафілококових інфекціями. ІФА для визначення антитіл до стафілококу. Має допоміжне значеніеБактеріологіческій метод1 день. Посів матеріалу на чашки з желточно-сольовим (ЖСА), кров'яним МПА, цукровим МПБ.2 день -облік характеру росту колоній. На ЖСА колонії стафілокока з рівними краями, гладкою поверхнею, райдужним віночком навколо, колір - від золотистого до білого.  На кров'яному МПА - зони гемолізу, в МПБ рівномірне помутніння. В мазку з колоній в забарвленні по Граму - коки у вигляді грон винограду. Пересівши решти колонії на скошений МПА для отримання чистої культури, а з цукрового МПБ на кров'яний МПА і ЖСА для отримання ізольованих колоній.3 день - ідентифікація виділеної культури стафілокока, диференціація видів за біохімічними властивостями, визначення чутливості до антибіотиків і фаговари. Виділення чистої культури з ЖСА і кров'яного МПА.4 день. Висновок про вид стафілокока. Ідентифікація культури, виділеної з цукрового МПБ5 день. Висновок про вид стафілокока, виділеного з цукрового МПБ.

Таблиця 2. Диференціація основних видів стафілокока

 ознаки  види стафілококів
 S. aureus  S. epidermidis  S. saprophyticus
 плазмокоагулаза + - -
 лецитиназа + - -
 Альфа-токсин + - -
 Анаеробна ферментація глюкози + + -
 Анаеробна ферментація маніту + - -
 Чутливість до новобиоцин S S R

Позначення: (+) - наявність ознаки; (-) - Відсутність ознаки; S - чутливий; R - резистентний.

а б
 Мал. 1. Стафілокок - Staphylococcus aureus. а -мазок з досліджуваного матеріалу, б - мазок з чистої культури. Забарвлення по Граму. Скупчення коків у вигляді грон винограду. х900

для виявлення плазмокоагулази цитратную плазму крові кролика розводять в 2 рази, розливають по 0,4 мл в пробірки, куди вносять петлею культуру стафілококів. Результати реєструють через 2, 4, 24 години. При наявності плазмокоагулази утворюється згусток.

У деяких випадках у виділених чистих культур стафілокока визначають наявність ДНК-ази, каталази, лизоцимной активності, фибринолизина, гіалуронідази.

лизоцимная активність виявляють по зонам просвітління навколо колоній стафілокока при його посіві на МПА в чашках Петрі з культурою Micrococcus luteus.

Визначення ДНК-ази. Добову агарове культуру стафілокока засівають на МПА в чашці Петрі, що містить ДНК. Після інкубації посівів при температурі 370 З протягом 18-24 годин поверхню МПА заливають 1 N розчином соляної кислоти. Наявність ДНК-ази характеризується появою зони просвітління навколо колоній.

Каталазного тест. Чисту культуру стафілокока вносять в краплю 3% -10% -го розчину перекису водню на склі і розтирають круговими рухами. При наявності каталази перекис водню розкладається з утворенням бульбашок кисню.

Cерологіческій методв діагностиці стафілококових інфекцій має допоміжне значення, используясь, в основному, для діагностики хронічних процесів (остеомієліт, септикопиемия і ін.). Для визначення антитіл до токсину стафілокока застосовують РНГА з еритроцитарних діагностикумів, навантаженим ?-токсином стафілокока або РН (реакція нейтралізації гемолітичної активності стафилококкового токсину антитоксинами сироватки крові хворого в присутності еритроцитів кролика). У здорових осіб титр стафилококкового антитоксина становить 0,5-4 АЕ. Розроблено також ІФА.

 Клінічно значущі види стафілококкаКоагулазоположітельние: S. aureus, S. hyicusкоагулазоотріцательние: S. epidermidis, S. saprophyticus, S. haemolyticus, S.hominis

 



досліджень | Самостійна робота студентів

Вивчення деяких факторів патогенності бактерій. | Постановка і облік розгорнутої реакції аглютинації з сироваткою крові хворого при підозрі на бруцельоз (I4 день захворювання). | Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів | Г. іммуногістологіческоеультраструктурному дослідження. | Вакцини і анатоксини | Сироватки та імуноглобуліни. | А Л Л Е Р Г Е Н И | Тема 17. Вчення ПРО ІНФЕКЦІЇ І імунітету. ПРАКТИЧНІ АСПЕКТИ ІМУНОЛОГІЇ. Контрольне заняття (тестовий контроль і усна співбесіда) | Методи виявлення збудника інфекції в матеріалі від хворого |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати