На головну

Самостійна робота студентів

1. Постановка і облік реакції зв'язування комплементу (РСК). Реакція протікає в дві фази. У першій фазі реакції беруть участь антиген, антитіло, комплемент. За відповідності антигену антитіла утворюється комплекс, що зв'язує комплемент. При відсутності відповідності антигену і антитіла комплемент залишається вільним. Друга фаза реакції (індикаторна) виявляє зв'язування комплементу і відбувається між комплементом і реагентами гемолітичної системи (суміш суспензії еритроцитів барана і гемолітичної сироватки). Якщо комплемент пов'язаний в першій фазі реакції, гемолізу еритроцитів під дією гемолізинів не відбувається (затримка гемолізу - реакція позитивна); якщо комплемент вільний, спостерігається гемоліз (реакція негативна). Реакцію ставлять відповідно до таблиці 11.

Таблиця 11

Схема постановки реакції зв'язування комплементу

 компоненти реакції  досвід  КПС  КОС  КС  КА  КК  КГС
 Сироватка хворого 1: 5, мл  0,5 - -  0,5 - - -
 Антиген в робочому титрі, мл  0,5  0,5  0,5 -  0,5  0,5 -
 Комплемент в робочій дозі, мл  0,5  0,5  0,5  0,5  0,5  0,5  0,5
 Позитивна сироватка, мл -  0,5 - - - - -
 Негативна сироватка, мл - -  0,5 - - - -
 Фізіологічний розчин - - -  0,5  0,5  0,5  1,0
 Інкубація при 370 З протягом 30 хвилин
 гемолітична система  1,0  1,0  1,0  1,0  1,0  1,0  1,0
 Інкубація при при 370 З протягом 30 хвилин, облік результатів

Позначення: КПС - контроль позитивної сироватки, КОС - контроль негативної сироватки, КА- контроль антигену, КК - контроль комплементу, КГС - контроль гемолітичної системи

2. Постановка і облік реакції кольцепреціпітаціі по Асколі.Реакція Асколі використовується для виявлення термостабильного антигену збудника сибірської виразки в матеріалі (шкіра, шерсть), підозрілий на забруднення даними мікробами. Техніка постановки реакції: в преціпітаціонную пробірку наливають цільну преципітуючих сібіреязвенную сироватку в кількості 0,5 мл. Пастерівської піпеткою нашаровуються по стінці пробірки 0,5 мл досліджуваного антигену. Антиген готують шляхом кип'ятіння матеріалу в розчині кислоти. До контрольної пробірку додають замість антигена фізіологічний розчин. У разі позитивного результату на кордоні антигену та сироватки утворюється преципітат у вигляді кільця.

3. Облік реакції преципітації в гелідля визначення токсигенності дифтерійних бактерій (Демонстрація). Чашку Петрі заливають живильним агаром, на дно чашки накладають смужку фільтрувального паперу, просоченої протидифтерійної антитоксичної сироваткою. Перпендикулярно смужці паперу засівають досліджувану культуру. Посів інкубують при 37 ° С протягом 24 годин. Виділяється при зростанні дифтерійної палички токсин дифундує в живильне середовище і вступає в реакцію з антитоксическими антитілами. У місцях взаємодії дифтерійного токсину з антитілами формується преципітат у вигляді білуватих ліній.

Мал. 15. Реакція преципітації в геледля визначення токсигенності дифтерійних бактерій

4. Іммуноелектрофорез (демонстрація). За допомогою іммуноелектрофореза аналізують різні антигени мікробів і вірусів, антитіла, сироватку крові людини, ліквор і т.д. Досліджуваний матеріал вносять у лунку, розташовану в гелі на скляній пластині і поділяють його фракції електрофорезом. Потім в лунку, вирізану у гелі паралельно лінії електрофоретичної міграції білків, вносять сироватки проти антигенів, які хочуть виявити (наприклад, проти антигенів менінгококів). Антитіла сироватки дифундують в агар і в місцях зустрічі з відповідними антигенами утворюють зони преципітації у вигляді дуги.

5. Реакція нейтралізації токсину антитоксином при ботулізмі (демонстрація). Реакцію ставлять з фільтратом, отриманим з консервів домашнього приготування (наприклад, з грибів), які послужили причиною отруєння хворого. До фільтрату додають поливалентную протівоботулініческой сироватку в розведенні 1:40. Суміш витримують 2 години при температурі 370 С, вводять миші внутрибрюшинно в обсязі 0, 5 мл. Контрольної миші вводять 0,5 мл фільтрату. Якщо токсин, що міститься в фільтраті, відповідає сироватці, то станеться нейтралізація токсину і миша не загине. Контрольна миша гине з явищами паралічів.

6. Облік реакції Кумбса (демонстрація). Реакція Кумбса дозволяє виявити неповні (одновалентні) антитіла, які при з'єднанні з еритроцитами, бактеріями і риккетсиями не дають видимих ??ефектів реакції антиген-антитіло. Додаток кролячій сироватки проти глобулінів людини призводить до аглютинації, тому що антитіла цієї сироватки бівалентності і взаємодіють з неповними антитілами, пов'язаними з бактеріями або еритроцитами, з утворенням осаду.

Реакція Кумбса при бруцельозі ставиться в тих випадках, коли титр класичного варіанту реакції аглютинації менше діагностичного (1: 100). Додавання в пробірки з негативними результатами антіглобуліновой сироватки призводить до збільшення титру антитіл. Це пов'язано з тим, що неповні антитіла з'являються в крові хворих в більш ранні терміни і в більш високих титрах, ніж повні.

7. Реакція флоккуляции (демонстрація). В результаті взаємодії токсину або анатоксину з антитоксической сироваткою випадають пластівці флоккулята. Найбільш інтенсивна і рання (ініціальна) флоккуляции відбувається в пробірці, де антиген і антитіло містяться в еквівалентних співвідношеннях.

Реакцію ставлять в два етапи. Спочатку за стандартною сироватці встановлюють порогову величину флоккуляции Lf (Limes flocculationis) в 1 мл токсину. Lf токсину визначається його мінімальною кількістю, яке дає ініціальний флоккуляцию з 1 міжнародної одиницею (ME) сироватки. Потім відомої сили токсин і випробувану антитоксичну сироватку розливають в пробірки в певному обсязі, витримують на водяній бані при температурі 45 ° С протягом 30 хв до випадання пластівців в одній з них.

Инициальная флоккуляции проявляється в тій пробірці, де кількість токсину відповідає кількості міжнародних одиниць сироватки. Якщо флоккуляции сталася в 3-й пробірці, в 0,4 мл сироватки знаходиться 40 ME. Отже, 1 мл сироватки містить 40: 0,4 = 100 ME.

8. Антістрептолізіновая реакція (демонстрація). Реакція заснована на феномені нейтралізації гемолитического дії мікробного токсину (0-стрептолізин) антитоксическими антитілами імунної сироватки.

Для постановки реакції попередньо визначають мінімальну гемолитическую дозу токсину (0-стрептолізин), тобто найменше його кількість, яке викликає гемоліз 0,2 мл 5% суспензії еритроцитів кролика. Потім визначають робочу дозу 0-стрептолізин, тобто найбільша кількість токсину, яке в суміші з 1 АЕ (антитоксической одиниці) стандартної антитоксичної сироватки повністю нейтралізується і не викликає гемолізу еритроцитів. Для постановки основного досвіду готують розведення досліджуваної сироватки, до кожного з яких додають робочу дозу токсину, інкубують 45 хв при 370 С, потім вносять рівний обсяг суспензії еритроцитів і інкубують 1 годину при 370 З і 18 годин при кімнатній температурі. Обов'язковою є контроль на можливість спонтанного гемолізу еритроцитів. Позитивна реакція характеризується відсутністю гемолізу в результаті нейтралізації стрептолізин (гемолизина) відповідними антитілами. Студенти роблять облік демонстраційної реакції.

9. Реакція гальмування гемаглютинації (РГГА - демонстрація) заснована на взаємодії вірусних антигенів (гемаглютиніну) зі специфічними антитілами, в результаті чого відбувається блокада (гальмування) гемагглютинирующей активності вірусу.

Розгорнуту РГГА ставлять в лунках полістиролових пластин. Попередньо визначають титр вірусного антигену в реакції гемаглютинації для підбору робочої дози. У лунках готують 2-кратні розведення досліджуваної сироватки, додають рівний об'єм суспензії вірусу в робочому розведенні і інкубують 2 ч при температурі 370 С. Потім додають 1% суспензії курячих еритроцитів, інкубують 2 ч і оцінюють результат по феномену гальмування гемаглютинації. Позитивна РГГА характеризується утворенням щільного осаду еритроцитів на дні лунки у вигляді диска або кільця з рівними краями. Титр антитіл визначають за останньою лунці з позитивною РГГА. Провести облік демонстраційної РГГА.



Постановка і облік розгорнутої реакції аглютинації з сироваткою крові хворого при підозрі на бруцельоз (I4 день захворювання). | Самостійна робота студентів

Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів. | Самостійна робота студентів | Вивчення характеру зростання S (E.coli) і R (B. cereus) форм бактерій на щільному і рідкої поживних середовищах (демонстрація). | педіатричні аспекти | Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів | Педіатричні аспекти теми | Освоєння біологічного методу діагностики. | Вивчення деяких факторів патогенності бактерій. |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати