На головну

Самостійна робота студентів

I. Мікрофлора шкіри (Закінчення). а) Вивчення характеру росту мікробів на середовищі Кесслера. Приготування мазка з середи Кесслера і забарвлення його за Грамом. б) Облік характеру росту на чашках із середовищем Левіна (посів мазків-відбитків шкіри пальців був зроблений на попередньому занятті). Зробити висновок про якісний склад мікрофлори шкіри рук.

2. Мікрофлора повітря вивчається зазвичай за допомогою аспіраційного методу. Досліджуваний повітря просасивается через апарат Кротова. Для визначення загальної кількості мікробів швидкість просасиванія повинна бути 25 л / хв тривалість експозиції 4-5 хв .; для виявлення коків використовується кров'яний МПА, тривалість експозиції - 10 - 15 хв. Кількість колоній, що виросли перераховують на 1м3 повітря. Нормативи мікробного обсіменіння повітря лікарняних приміщень відображені в таблиці 7.

3. Мікрофлора води (Демонстрація). Критерії оцінки санітарного стану водопровідної води:

а) визначення загального мікробного числа водопровідної води. Зроблено посів 1 мл води на чашку з MПа. Підраховується кількість вирослих колоній - мікробне число води. В 1 мл водопровідної води допускається не більше 50 мікроорганізмів;

Таблиця 7.

Показники мікробного обсіменіння повітря в лікарняних приміщеннях

 Місце відбору проб  мікробне число  зміст S.aureus
 ОпераціонниеДо початку работиВо час роботи  Не більше 500  Не допускається
 Не більше 1000  Не допускається
 Не більше 1000  Не допускається
 пологові кімнати  Не більше 1000  Не допускається
 Палати для недоношених дітей  Не більше 750  Не допускається

б) визначення, коли-титру та колі-індексу водопровідної води бродильним мeтодом (демонстрація). Водопровідна вода в кількості 333 мл (3 обсягу по 100,0 мл; 3 обсягу по 10,0 мл; і 3 обсягу по I мл) засівається на глюкозо-пептонную середу. Посіви інкубують в термостаті при 37 ° С 24 години. З усіх проб, де відбулося зростання з помутнінням, кислото- і газоутворенням, проводять висів на чашки Петрі з середовищем Ендо. Чашки інкубують в термостаті при 37 ° С 16-18 годин. Облік результатів проводять за наявністю типових колоній (забарвлених в яскраво-рожевий колір - лактозопозитивних), морфології мікроорганізмів в цих колоніях (грамнегативні палички) і визначенню оксидази шляхом посіву колоній на фільтрувальну папір, змочену диметил-парафенілдіаміном. При негативному Оксидазний тесті колір паперу не змінюється, при позитивній вона забарвлюється в синій колір протягом 1 хв. Бактерії пологів Esherichia, Citrobacter, Enterobacter оксидазної активністю не володіють. Грам-негативні палички, не утворюють оксидазу, пересівають в напіврідкий глюкозний живильний агар, інкубують при 370 З протягом 18-24 годин. Розрахунок коли-індексу здійснюється за спеціальними таблицями (див. Табл.8).

в) визначення колі-індексу методом мембранних фільтрів (демонстрація). Мембранний фільтр поміщають в воронку Зейтца, вмонтовану в колбу Бунзена, яка приєднується до вакуум-насоса. Мембранні фільтри попередньо стерилізують кип'ятінням в дистильованої воді. Досліджувану воду фільтрують в обсязі 500,0 мл. Потім фільтри поміщають на поверхню середовища Ендо в чашку Петрі і після інкубації при 370З протягом доби підраховують кількість колоній червоного кольору. Колонії червоного кольору переносять на фільтрувальний диск, змочений диметил-парафенілдіаміном для визначення оксидазної активності. При наявності оксидази колонії забарвлюються в синій колір. 2-3 колонії, що не змінили первісну забарвлення, пересівають в напіврідкий глюкозний живильний агар, інкубують при 370 З протягом 18-24 годин. При наявності газоутворення підраховують число червоних колоній на фільтрі і визначають колі-індекс. Нормативи для питної води - число мікробів в 1 мл - не більше 50 клітин, колі-індекс (кількість кишкових паличок в 1 літрі води) - не більше 2. Коли-титр - кількість води, в якому знаходиться 1 кишкова паличка) - 500.

Таблиця 8

Визначення колі-індексу та колі-титру при дослідженні води

 кількість положітельнихрезультатов  Колі-індекс  межі індексу  Коли-титр
 З 3 обсягів по 100 мл  З 3 обсягів по 10 мл  З 3 обсягів по 1 мл  Нижній  верхній  
 менше 3 - -  більше 3300
 0,5
 0.5
 0.5
 ...  ...  ...
 ...  ...  ...  ...  ...  ...  ...
 0,9
 понад 1100 - -  менше 0,9

4. Мікрофлора грунту(Демонстрація).

а) Визначення загального мікробного числа ґрунту. Наважку грунту (30 г), вносять в колбу з водою об'ємом 270 мл, готують розведення 10-3, 10-4, 10-5, Змішують з 0,1 мл зазначених розведень суспензії грунту з 40 мл розплавленого і охолодженого до 400З MПa, потім виливають другим шаром в чашки Петрі з 2% МПА. Посіви інкубують при 370 З протягом 18-24 годин, після чого визначають кількість вирослих на чашці колоній;

б) Визначення перфрингенс-титру грунту при посіві її різних розведенні на молоко або середу Вільсона-Блера (агар з глюкозою, хлоридом заліза і сульфитом натрію). Облік результатів проводять по згортанню молока або утворення чорних колоній Cl. perfringens через 48 годин на середовищі Вільсона-Блера. Нормативи санітарного стану грунту представлені в таблиці 9. Демонстрацію описати, замалювати.

Таблиця 9

Санітарний стан грунту за даними мікробіологічного дослідження

 характеристика грунту  Коли-титр  Перфрінгенс-титр  Число термофільних бактерій в 1 м грунту
 ЧістаяЗагрязненннаяСільно забруднена  1,0 і вище  0,01 і вище  102 - 103
 0,9 - 0,01  0,009-0,0001  від 103 - 105
 0,09 і нижче  0,00009 і нижче  105 - 4х106

в) Мікрофлора харчових продуктів (демонстрація).Якість санітарно-бактеріологічного стану молока і молочних продуктів оцінюється за присутністю мезофільних аеробних і факультативно-анаеробних мікроорганізмів (МАФАМ) і присутності бактерій групи кишкової палички (БГКП).

визначення МАФАМ (демонстрація). Молоко розводять стерильним фізіологічним розчином в розведеннях 1: 10,1: 100, 1: 1000. За 1,0 мл кожного розведення розплавленого і охолодженого до 400З MПa засівають на дно чашки Петрі з МПА, інкубують при 370 З протягом 18-24 годин, потім підраховують кількість колоній, що виросли.

- Визначення БГКП (демонстрація). Незбиране пастеризоване молоко засівають в 6 пробірок із середовищем Кесслера (в 3 пробірки - по 1 мл, в інші - по 0,1 мл). Посіви інкубують при 430З протягом 1 доби, після чого з пророслих середовищ роблять посіви на середовище Ендо і інкубують при 370З протягом доби. З вирослих червоних колоній готують мазки в забарвленні по Граму, микроскопируют і роблять посіви на середу Козера (дистильована вода, фосфат натрію-амонію, фосфат калію однозамещенного, сульфат магнію, цитрат калію) і в пептонную воду з глюкозою, культивуючи відповідно при 370З і 430З протягом 18-24 годин. Облік виробляють з розщеплення глюкози з утворенням кислоти і газу при відсутності росту на цитратной середовищі Козера. Аналогічно досліджують вершки, молочно-кислі продукти, морозиво.

Провести облік результатів демонстраційного досвіду по визначенню МАФАМ і БГКП

Виявлення патогенних бактерій (демонстрація). Зроблено посів різних розведень молока на желточно-сольовий агар, середовище Левіна, кров'яний МПА. Визначити наявність патогенних бактерій. Зробити висновок. Результати записати.

Санітарно-бактеріологічне дослідження напоїв (лимонад, мінеральні води) - демонстрація. Визначають мікробне число і БГКП, використовуючи при цьому методи, що застосовуються для дослідження питної води. Перед проведенням дослідження лимонад нейтралізують 10% розчином бікарбонату натрію, перевіряючи реакцію середовища за допомогою лакмусового індикатора. Відібрані проби мінеральної води витримують при 430 З протягом 1 год для видалення надлишку газу. Коли-титр визначають методом мембранних фільтрів. З цією метою 500 мл напою фільтрують через мембранні фільтри (100 мл через 1 фільтр), після чого останні промивають стерильною водою для видалення залишків мінеральних солей і поміщають на поверхню середовища Ендо. Посіви інкубують при 370 С, після чого визначають БГКП. Демонстрацію описати, замалювати.

Санітарно-бактеріологічні нормативи для лимонаду, квасу, фруктово-ягідних безалкогольних напоїв і мінеральних вод повинні відповідати нормативам питної водопровідної води.

Санітарно-бактеріологічне дослідження м'яса, ковбасних виробів і м'ясних продуктів - демонстрація. Визначають кількість бактерій в забарвлених за Грамом мазках-відбитках зі шматочків м'яса розміром 2х1,5х2,5 см. Норматив для свіжого м'яса - не більше 10 бактеріальних клітин в полі зору.

Бактеріологічне дослідження м'яса і м'ясних продуктів включає визначення кількості МАФАМ, БГКП, сальмонел, бактерій роду Proteus, коагулазоположітельних стафілококів і клостридій. Аналіз поверхневих і глибинних ділянок продукту проводять не пізніше ніж через 4 години з моменту відбору проб. При дослідженні глибинних ділянок зразки продукту попередньо обробляють спиртом і обпалюють. До навішування продукту масою 20 г додають 80 мл стерильного фізіологічного розчину і гомогенізують в ступці або електричному гомогенизаторе. Для визначення загальної кількості мікробів в 1 г продукту роблять посів 0,1 і 0,01 г продукту на поживний агар методом пластинчастих розводок Коха, інкубують 48 год і підраховують число колоній. Для визначення бактерій групи кишкової палички в 1 г продукту виробляють посів 5 мл суспензії на елективних-диференціальну середу Кесслера, інкубують протягом 18-20 год. З наступним пересівом на середовище Ендо. Визначення сальмонел проводять в навішуванні продукту не менше 25 м Роблять посів розведення навішування в 100 мл середовища збагачення (селенітовий бульйон і магнієва середа), інкубують протягом 24 год., Після чого роблять висів на вісмут-сульфіт агар

При наявності Proteus spp. спостерігається повзуче зростання. В мазках виявляють грамнегативні палички, визначають їх рухливість і ідентифікують культуру бактерій.

Для визначення коагулазоположітельних стафілококів проводять посів 0,2 мл суспензії продукту на желточно-сольовий агар, інкубують посіви при 370 З і при кімнатній температурі. При виявленні стафілококів проводять їх ідентифікацію.

Для виявлення анаеробних спороутворюючих бактерій Clostridium perfringens роблять посів 10-кратних розведенні суспензії в сульфітціклосеріновую середу (СЦС) і середу Вільсона-Блера. Посіви інкубують при 460 З протягом 12 год; при наявності C.perfringens спостерігається почорніння середовища. При позитивному результаті посіву розведення 10 -1 вважається, що в 1 г продукту міститься 10 клітин відповідних бактерій; розведення 10 -2 - 100 клітин і т.д. Демонстрацію описати, замалювати.

Ковбасні вироби і продукти з м'яса відповідно до чинних нормативів не повинні містити бактерії групи кишкової палички при дослідженні 1 г продукту, сальмонел в 25 г, бактерій роду Proteus і сульфітредукуючих клостридий 0,1 г; мікробне число не повинно перевищувати 103.

Санітарно-бактеріологічне дослідження консервів - демонстрація. У консервах визначають наявність аеробних і анаеробних бактерій, при необхідності (за епідеміологічними показниками) - Clostridium botulinum і ботулінічного токсину. Перед бактеріологічним дослідженням консервну банку перевіряють на герметичність в посудині з гарячою водою, ставлять контроль на бомбаж, витримуючи в термостаті при 37 "С протягом 5 діб, після чого миють теплою водою, висушують, протирають спиртом і обпалюють верхню кришку змоченим спиртом палаючим ватним тампоном . Вміст банки засівають для виявлення аеробного флори в дві пробірки з бульйоном, а для виявлення анаеробної мікрофлори - в дві пробірки з середовищем Кітт-Тароцці. Посіви інкубують при 370 З протягом 5 діб. При наявності росту аеробні бактерії пересівають на поживний агар, середовище Ендо, скошений агар (по Шукевичу) і на поживний агар з 1% глюкози. З середовища Кітт-Тароцці беруть 1-2 мл, вносять в чашки Петрі і заливають розплавленим і охолодженим до 45-480 З поживним агаром з 1% глюкози. Після застигання на поверхню середовища поміщають стерильне предметне скло (для створення анаеробних умов). Посіви інкубують протягом 1 доби при 370 С. З вирослих колоній отримують чисту культуру, яку потім ідентифікують за загальноприйнятою схемою.

Для виявлення ботулінічного токсину досліджувані проби консервів фільтрують і з фільтратом ставлять реакцію нейтралізації токсину з антитоксическими Протиботулінічні сироватками типів А, В, С, Е, F на білих мишах або виявляють присутність токсину за допомогою інших серологічних реакцій (РНГА, імуноферментний аналіз). У консервах не допускається присутності C.botulinum і його токсину, С.регfringens і інших патогенних бактерій.

Присутність аеробного неспороутворюючих флори вказує на недостатню ефективність застосованих методів консервування та можливість псування. Присутність сапрофітних аеробних бацил {B.subtilis, B.mesentericus) є допустимим при герметичності і відсутності бомбажа консервних банок.



Самостійна робота студентів | Педіатричні аспекти теми

Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів | Знайомство з методами асептики, антисептики, дезінфекції та стерилізації. | Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів. | Самостійна робота студентів | Вивчення характеру зростання S (E.coli) і R (B. cereus) форм бактерій на щільному і рідкої поживних середовищах (демонстрація). | педіатричні аспекти |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати