На головну

Самостійна робота студентів

I. Вивчення мікрофлори шкіри.а) Дослідження змивів з поверхні шкіри рук. Стерильним тампоном, змоченим в середовищі Кесслера (пептонна вода з лактозою, жовчю і генціан-Віолета), роблять змиви з обох рук, протираючи долоні, міжпальцеві проміжки і піднігтьові простору, тампон поміщають в середу Кесслера, інкубують в термостаті при 370 З 24 години. б) посіви-відбитки пальців на сектора чашки із середовищем Левіна. Облік результатів посівів буде виконаний на наступному занятті.

2. Вивчення мікрофлори порожнини рота. Приготування мазка з зубного нальоту. Забарвлення по Граму або по Буррі. Препарат промікроскопувати і замалювати.

3. Дослідження мікрофлори зіву. Провести відбір матеріалу із зіву за допомогою тампона, приготувати мазок, забарвити за Грамом, промікроскопувати. Мікрокартіну замалювати.

4. Вивчення мікрофлори кишечника (демонстрація). З досліджуваних фекалій готують розведення 10 -2, 10-4, 10-6 і т.д. За 0,1 мл кожного розведення засівають на середовища Ендо, кров'яний, желточно-сольовий агар, середовища Сабуро, Блаурокка (печінковий агар з лактозою і цистином), інші поживні середовища та інкубують при 370 С. Підраховують число вирослих колоній і визначають число КУО в 1 г матеріалу. Проводять відсів 2-3 колоній кожного виду для виділення та ідентифікації чистих культур мікроорганізмів за біохімічними властивостями. Утримання мікрофлори кишечника в колонієутворюючих одиницях (КУО) у здорової людини представлено в таблиці 5. На підставі обліку демонстраційних посівів зробити висновки про стан мікробіоценозу кишечника обстеженого пацієнта.

5. Кількісне визначення чутливості бактерій до антимікробних препаратів методом серійних розведенні (демонстрація). Метод застосовують для визначення мінімальної переважної концентрації (МПК) - найменшої концентрації антибіотика, повністю переважної зростання досліджуваних бактерій. Для цього готують основний розчин антибіотика, що містить препарат в певній концентрації (мкг / мл або ОД / мл) у фізіологічному, буферном розчині або в спеціальному розчиннику. Основний розчин використовують для приготування 2-кратних серійних розведень антибіотика (від 1 до 128 од / мл) в живильному середовищі - бульйоні (в обсязі 1 мл) або агарі. З досліджуваної бактеріальної культури готують суспензію стандартної щільності і засівають по 0,1 мл на середовища з різною концентрацією антибіотика, а також на середу без препарату (контроль культури). Посіви інкубують при 370 З протягом 20-24 год або більше (для повільно зростаючих бактерій), після чого зазначають результати досвіду по помутніння поживного бульйону або появи видимого росту бактерій на агарі, порівнюючи з контролем. Найменша концентрація антибіотика, повністю переважна зростання досліджуваної культури, приймається за МПК.

6. Мікротест-системи для визначення чутливості до антимікробних препаратів (демонстрація) призначені для швидкого визначення клінічної чутливості бактерій до антибіотиків, які в 2 стандартних концентраціях (середній терапевтичній і

Таблиця 5.

Утримання мікрофлори кишечника здорової людини в нормі (КУО / г фекалій)

 Найменування представників  КУО
 біфідобактерії  108 - 1010
 лактобактерії  106 -109
 бактероїди  107 -109
 Пептококи і пептострептококки  105 - 106
 ешерихії  106 -108
 Стафілококи (гемолітичні, плазмокоагулирующей)  103
 Стафілококи (негемолітичні ,. коагулазоотріцательние)  104 -105
 стрептококи  105 - 107
 клостридії  103 - 105
 еубактеріі  109 - 1010
 дріжджоподібні гриби  103
 Умовно-патогенні ентеробактерії, неферментірующіеграмотріцательние палички  103

максимальної) знаходяться в лунках пластикових планшетів. Мірної бактеріологічної петлі (обсяг 1 мкл) досліджувану чисту культуру вносять в 5 мл стандартної живильного середовища, що містить індикатор, приготовлену бактеріальну суспензію розливають в лунки планшета по 0,1 мл і інкубують при оптимальних для даного виду бактерій умовах температури і газового складу середовища. Про зростання бактерій судять по зміні кольору індикатора. Якщо бактерії зберігають життєздатність в присутності антибіотика, виділення продуктів метаболізму призводить до зміни кольору індикатора. Відсутність зміни кольору свідчить про повне придушення життєдіяльності мікроба. Результати визначають через 4 ч інкубації за допомогою спектрофотометра.

1. Визначення клінічної чутливості бактерій до антимікробних препаратів методом дисків (дифузний тест) - демонстрація.Метод заснований на придушенні зростання бактерій на щільному живильному середовищі під дією строго певної концентрації антибіотика, що міститься в стандартному паперовому диску. Препарат, диффундируя в агар створює навколо диска градієнт концентрації антибіотика з формуванням зони затримки росту, розмір якої залежить від чутливості бактерії і властивостей антибіотика. Зміст препарату визначається виходячи з терапевтичних концентрацій кожного антибіотика і середніх значень мінімальних пригнічують концентрацій для патогенних бактерій. Досліджувану бактеріальну культуру, суспендованих в фізіологічному розчині, засівають газоном в чашки Петрі на спеціальні живильні середовища (Мюллера-Хінтон або АГВ, які не перешкоджають дифузії антимікробних речовин і не роблять на них негативної дії), на поверхню яких накладають диски з антибіотиками. Посіви інкубують 18-20 год при 370 С. Облік результатів здійснюють шляхом вимірювання діаметра зони повної затримки росту. Висновок про чутливість бактерій до антибіотиків здійснюють з урахуванням спеціально розроблених критеріїв (таблиця 6).

8. Кількісне визначення чутливості бактерій до антимікробних препаратів за допомогою Е-тесту. Е-тест є варіантом дифузійного методу, що дозволяє визначати МПК антибіотика. Для цього замість індикаторних дисків з антибіотиками застосовують спеціальні полімерні смужки, що містять іммобілізовані антимікробні препарати у вигляді безперервного градієнтаконцентрацій від 0,016 до 256 мкг / мл. На іншій стороні смужки Е-тесту нанесена шкала значень МПК. При приміщенні смужки на поверхню агару регульований процес дифузії забезпечує створення в живильному середовищі навколо смужки стабільного градієнта концентрації препарату, відповідного шкалою. Після інкубації посіву навколо смужки утворюється зона затримки росту, що має форму еліпса. Значення МПК відповідає місцю перетину еліпсовою зони з смужкою Е-тесту. Для інтерпретації результатів (оцінки клінічної чутливості) використовують стандартні критерії.

Таблиця 6

Інтерпретація значень діаметрів зон затримки росту при визначенні чутливості мікроорганізмів до антимікробних препаратів (середа АГВ)

 Протимікробні препарати в диску  Діаметр зон або культур в мм
 стійких  проміжних  чутливих
 Бензилпенициллин для стафілококів  <20  21-28  > 29
 Бензилпенициллин для ін. Бактерій  <10  11-16  > 17
 Ампіцилін для стафілококів  <20  21-28  > 29
 Ампіцилін для Грам (-) бактерій  <9  10-13  > 14
 Карбеніцилін 2.5 мкг  <14  15-18  > 19
 Карбеніцилін 100 мкг (для .aeruginosa)  <11  12-14  > 15
 Оксациллин 10 мкг  <15  16-19  > 19
 Оксациллин 1 мкг  <10  11-12  > 13
 Азлоцилін (для P.aeruginosa)  <13  14-16  > 17
 цефалотин  <14  15-18  > 19
 Цефазолін  <14  15-18  > 19
 цефуроксим  <14  15-18  > 19
 цефокситин  <14  15-18  > 19
 цефотаксим  <14  15-18  > 19
 цефтриаксон  <14  15-18  > 19
 цефоперазон  <14  15-18  > 19
 цефтазидим  <14  15-18  > 19
 Цефалексин  <14  15-18  > 19
 цефаклор  <14  15-18  > 19
 Цефиксим  <15  16-19  > 20
 Ванкоміцин для ентерококів  <14  15-16  > 17
 Ванкоміцин для стафілококів  <11 -  > 12
 фузидин  <16  17-20  > 21
 линкомицин  <19  20-23  > 24
 кліндаміцин  <14  15-20  > 21
 олеандоміцин  <12  13-17  > 18
 еритроміцин  <17  18-21  > 22
 азитроміцин  <13  14-17  > 18
 тетрациклін  <16  17-21  > 22
 доксициклін  <15  16-19  > 20
 левоміцетин  <15  16-18  > 19
 рифампіцин  <12  13-15  > 16
 поліміксин  <11  12-14  > 15
 стрептоміцин  <16  17-19  > 20
 канаміцин  <14  15-18  > 19
 неомицин  <12  13-16  > 17
 гентаміцин  <15 -  > 16
 тобраміцин  <14 -  > 15
 сізоміцін  <15 -  > 16
 амікацин  <14  15-16  > 17
 нетилміцин  <12  13-14  > 15
 фурадонин  <15  16-18  > 19
 фурагин  <15  16-18  > 19
 ципрофлоксацин  <15  16-20  > 21
 азтреонам  <15  16-21  > 22
 Піперацилін (для P.aeruginosa)  <17 -  > 18
 офлоксацин  <12  13-16  > 17
 рокситроміцин  <14  15-18  > 19
 кларитроміцин  <13  14-17  > 18
 цефамандол  <14  15-17  > 18
 Цефепім  <14  15-17  > 18
 іміпінем  <13  14-15  > 16
 Мероменем  <13  14-15  > 16
 Налідиксова кислота  <12  13-17  > 18

 



педіатричні аспекти | Самостійна робота студентів

Правила роботи в мікробіологічних лабораторіях. | Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів | Знайомство з методами асептики, антисептики, дезінфекції та стерилізації. | Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів. | Самостійна робота студентів | Вивчення характеру зростання S (E.coli) і R (B. cereus) форм бактерій на щільному і рідкої поживних середовищах (демонстрація). |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати