На головну

Самостійна робота студентів

1. Люмінесцентна мікроскопія. Забарвлення суперечка шляхом прямого флюорохромірованія. Конструктивні особливості люмінесцентного мікроскопа складаються в наявності потужної освітлювальної лампи (наприклад, ртутно-кварцовою), а також спеціальних світлофільтрів (збудливий люмінесценцію синій фільтр, розташований за джерелом освітлення, а також «замикає» фільтр на окулярі). Люмінесцентна мікроскопія має ряд переваг перед звичайною при світловій мікроскопії, зокрема, можливістю дослідження живих мікроорганізмів, виявлення їх в матеріалі в невеликих кількостях, наявністю кольорового зображення. Як правило, досліджують вторинну (наведену) люмінесценцію мікроорганізмів при забарвленні їх спеціальними люминесцирующими барвниками - флюорохромами (найбільш часто використовують изотиоцианат флюоресцеіна, акридин помаранчевий, аурамін, родамін і т. Д.). У імунофлюоресцентному методі дослідження застосовують сироватки або антигени, мічені флюорохромами.

Студенти вивчають демонстраційний препарат суперечка, пофарбований методом прямого флюорохромірованія (В. А. Романов і В. Н. Язинін, 1981). Методика забарвлення: препарати, виготовлені з культури сінної палички (Bacillus subtilis), Обробляють водним розчином аурамін в концентрації 1: 1000 протягом 2 хвилин. Потім препарат обесцвечивают 0,5% розчином сірчаної кислоти протягом 30 сек. і після промивання дофарбовують протягом I хвилини водним розчином родаміну 6ж в концентрації 1: 5000. Висушені препарати переглядають в люмінесцентному мікроскопі. На тлі червоно-цегельного світіння вегетативних форм бактерій, забарвлених родаміном, виявляються овальні, злегка витягнуті суперечки яскраво-зеленого або жовтого кольору.

2. Органи рухливості бактерій - джгутики. Вивчити демонстраційний препарат культури протея - Proteus vulgaris, Пофарбований сріблення по Морозову. В ході обробки (розпушування протравов - танін з фенолом з подальшою імпрегнацією сріблом) джгутики збільшуються в діаметрі, досягаючи меж роздільної здатності иммерсионного мікроскопа. Оточуючи тіло вірусу з усіх боків, вони свідчать про приналежність протея до перітріхі.

3. Виявлення рухливості протея методом «роздавленої краплі».

Методика приготування препарату:

· На середину предметного скла наносять краплю бульонной культури вульгарного протея. Краплю обережно покривають покривним склом, не допускаючи утворення між стеклами бульбашок повітря;

· Препарат микроскопируют сухий системою, з використанням об'єктива х40. Оптика мікроскопа повинна бути дуже чисто протерта, конденсор злегка опущений, а його діафрагма прикрита з метою затемнення поля зору.

· Протей є перітріхі, пересувається в поле зору безладно. Важливо не сплутати характер егодвіженія з пасивним переміщенням в результаті броунівського руху - хаотичного коливання клітин.

4. Вивчення рухливості протея (Proteus vulgaris) в препараті «висяча крапля» з використанням фазово-контрастної мікроскопії (демонстрація). Фазово-контрастне пристрій призначений для мікроскопії живих нефарбованих об'єктів. Пристрій комплектується спеціальними об'єктивами з фазовими кільцями, а також спеціальним фазовим конденсором з револьвером спеціальних кільцевих діафрагм для кожного об'єктива. Фазово-контрастне пристрій переводить невидимі фазові зміни пучка світла в контрастні амплітудні, створюючи контраст між незафарбованих мікроорганізмом і навколишнім середовищем, а також в структурі самих мікробів.

Препарат висячої краплі готують, завдаючи в центр покривного скла краплю досліджуваного матеріалу. Предметне скло з лункою, краї якої змащують вазеліном, притискають до покривному склу так, щоб крапля знаходилася в центрі лунки. Після цього препарат перевертають покривним склом вгору; крапля повинна вільно висіти над лункою, не торкаючись її дна або краю. Для мікроскопії спочатку використовують об'єктив «малого» збільшення (х8) для знаходження краю краплі, після чого визначають рухливість бактерій за допомогою об'єктива «великого» збільшення (х40) або иммерсионной мікроскопії.

5. Морфологія борелій - збудників поворотного тифу (Borrelia recurrentis). Мазок з крові хворого поворотним тифом (демонстрація). Забарвлення за Романовським - Гімза. Барвник складається з суміші АЗУР-2 (продукт окислення метиленовогосинього) і еозину. Серед еритроцитів помітні тонкі лілові подовжені спірохети, що утворюють до 9 великих нерівномірних завитків.

6. Морфологія збудника сифілісу (Treponema pallidum). Забарвлення по Буррі (тушевие препарат). На темному тлі видно безбарвні трепонеми з 8 - 12 рівномірними завитками.

7. Морфологія і рухливість лептоспір - Leptospira interrogans. Темнопольна мікроскопія (демонстрація). Представники цього роду мають тонкі часті неглибокі завитки і володіють своєрідним рухом, під час якого кінці обертаються під кутом до основної частини тіла. У стадії спокою мають форму гачка. У темнопольному мікроскопі використовуються спеціальні конденсори (параболоїд-конденсор з затемненням в центрі і внутрішньої дзеркальною поверхнею для відображення променів світла, або кардіоїд-конденсор, в якому промені світла відбиваються спочатку від опуклої поверхні, а потім від увігнутої). Темнопольного конденсори створюють ефект бічного освітлення, в результаті чого на темному тлі видно світяться мікроорганізми.

Морфологія спірохет представлена ??на рис. 9.

Мал. 9. Спірохети. а - трепонеми; б - боррелии; в - лептоспіри

1. Морфологія рикетсій - збудників епідемічного висипного тифу (Rickettsia provazeki).Забарвлення по Здродовського.

Методика забарвлення:

· Забарвлення мазка фуксином Циля протягом 5 хвилин.

· Промивання водою.

· Обробка мазка 0,01% розчином соляної кислоти.

· Промивання водою.

· Забарвлення метиленовим синім протягом 1 хвилини.

· Промивання водою, висушування, мікроскопія.

Рикетсії, пофарбовані за цим методом, виглядають у вигляді дрібних поліморфних мікроорганізмів рубіново-червоного кольору.

9. Хламідії (Chlamidia trachomatis)в мазках з уретри хворих на урогенітальний хламідіоз (всередині - і позаклітинне розташування). Демонстраційний препарат, забарвлення за Романовським-Гімза.

Мал. 10 Риккетсии. 1 кокковидной; 2 - паличкоподібні; 3 - ниткоподібні; 4 - розмноження в цитоплазмі еукаріотичних клітин.

10. Актиноміцетив матеріалі від хворого актиномикозом (забарвлення за Романовським-Гімза). Замалювати типові для цього захворювання друзи актиноміцетів, відзначити променисту структуру актиноміцетів.

Мал. 11. Актиноміцети



Самостійна робота студентів | Самостійна робота студентів

Додатковий перелік питань | Мікробіологія, вірусологія, імунологія | МЕТА ТА ЗАВДАННЯ ДИСЦИПЛІНИ | ЛАБОРАТОРНІ ЗАНЯТТЯ. | III. МЕТОДИЧНІ МАТЕРІАЛИ ТА ТЕХНІЧНІ ЗАСОБИ | Робоча програма ____________________ узгоджена ________________________________________________ | Б. Додаткова | Етапи розвитку мікробіології | Організація роботи та обладнання мікробіологічної лабораторії, правила роботи в ній. | Правила роботи в мікробіологічних лабораторіях. |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати