На головну

Робота № 3. Визначення активності фруктозо-1-фосфаталь-долази.

  1. C) Кілька років працював Білоруський пересувний театр під керівництвом Владислава Голубка
  2. E1. Принцип активності користувача
  3. I. 4. Які типи хвиль існують в природі, техніці? Які хвилі називаються пружними? Дайте визначення поздовжніх і поперечних пружних хвиль.
  4. I. Визначення рівнянь лінійної регресії
  5. I. ПІДГОТОВЧА РОБОТА
  6. I. ПОСТАНОВКА ПРОБЛЕМИ І ВИЗНАЧЕННЯ МОВНИХ ЖАНРІВ 1 сторінка
  7. I. ПОСТАНОВКА ПРОБЛЕМИ І ВИЗНАЧЕННЯ МОВНИХ ЖАНРІВ 2 сторінка

принцип методузаснований на зв'язуванні фосфотріоз, що утворюються після розщеплення ферментом фруктозо-1-фосфату, гидразином, з подальшим визначенням триоз, що звільняються при лужному гідролізі продуктів дінітрофенілгідразіновой реакції.

Хід роботи. В пробірку внести 1 мл сироватки крові і 0,5 мл субстратного розчину (100 мл барієвої солі фруктозо-1-фосфату розчинити в 180 мл дистильованої води, додати 82 мл гідразин-гідрохлориду та довести рН до 7,4, додаючи 0,75н. NаОН, долити веронал-медіналовой буфер рН 7,4 до кінцевого об'єму 400 мл).

До контрольної пробірку внести 1 мл сироватки крові. Інкубуйте термостаті контрольну і дослідну пробу 30 хв при 37 ° С. Після інкубації в контрольну пробірку додати 0,5 мл субстратного розчину. Решта реактиви доливати в обидві пробірки одночасно. Для дефосфорилирования утворилася фосфотріози додати по 1 мл 0,75 н NаОН і залишити при кімнатній температурі на 30 хв. Додати по 0,5 мл 2,4-дінітрофенілгідразіна 0,1% розчину в 2 н НСI (500 мл 2,4-ДНФГ розчиняють в 80 мл концентрованої НСI при слабкому нагріванні і доводять до 500 мл водою) і залишити на 30 хв. Потім додати по 3 мл 0,75 н NаОН і через 5 хвилин дослідну пробу колоріметріровать на ФЕК при зеленому світлофільтрі проти контролю.

Розрахунок.Кількість утворилися триоз визначити за стандартною кривою, побудованої по діоксіацетон. Активність ферменту розрахувати за формулою А = а / Т, де А - активність ферменту (мкмоль) в 1 мл сироватки за 1 хв; а - кількість які утворилися триоз, розраховане за стандартною калібрувальної кривої; Т - час інкубації (хв).

Клініко-діагностичне значення.Активність альдолази в сироватці крові збільшується при інфекційному гепатиті, токсичних ураженнях печінки і деяких інших захворюваннях.



Робота № 2. Кількісне визначення активності альдолази в сироватці крові (метод Брунса в модифікації Е. Н. Валуйськ і В. І. Товарницького). | Робота №4. Кількісне визначення активності каталази крові методом А. Н. Баха і С. Р. Зубкової.

Заняття № 1. Біохімія крові. Білки плазми крові. Гемостаз. | Методичні вказівки до самопідготовки | Приклади контролю вихідного рівня знань | Робота № 1. Кількісне визначення білірубіну в сироватці крові за методом Іендрашека. | Робота № 2. Визначення лужного резерву крові титрометричним методом | Еталони відповідей на ситуаційні задачі | Заняття № 2. Біохімія печінки. Механізми знешкодження токсичних речовин. | Методичні вказівки до самопідготовки | Приклади контролю вихідного рівня знань | Робота № 1. Проби коллоідоустойчівості білків сироватки крові. |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати