Головна |
Принцип методу. Тріацілгліцеріни (ТАГ) омиляются гідроксидом калію з утворенням гліцерину, при окисленні якого утворюється формальдегід. Реактив, що містить ацетилацетон, взаємодіє з формальдегідом з утворенням забарвленого продукту, інтенсивність забарвлення якого визначають фотометричним.
Хід визначення. ТАГ визначають, вносячи реактиви в 3 пробірки з притертою пробкою в наступній послідовності:
Розчин, мл | |||
компоненти | опитнаяпроба | еталонна проба | контрольна проба |
Сироватка крові, мл | 0,1 | - | - |
Еталонний розчин триолеином, мл | - | 0,1 | - |
Дистильована вода, мл | - | - | 0,1 |
Ізопропанол, мл | |||
Перемішують і додають мернойложечкой адсорбент | |||
0,4 г | 0,4 г | 0,4 г | |
Струшують на змішувачі в теченіе15 хв. | |||
Центрифугують при 3000 об / хв 5 мін.В 3 пробірки: | |||
Надосадова рідина, мл | |||
Розчин КОН, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Інкубують в водяній бані при 60 ° Св протягом 15 хв. | |||
Охолоджують у холодній воді | |||
Окислювальний розчин, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Залишають на 10 хв. при кімнатній температурі | |||
Реактив на формальдегід (ацетилацетон), мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Інкубують в водяній бані при 60 ° Св протягом 30 хв. |
Після охолодження вимірюють оптичну щільність дослідної (Ео) І еталонної (Ее) проб проти контрольної проби на ФЕК при довжині хвилі 410 нм в кюветах на 10 мм.
Розрахунок. Зміст ТАГ розраховують за формулою:
Х = Ео/ Еэ? 3,39
де Х - вміст ТАГ в сироватці крові, ммоль / л,
Ео і Еэ - Оптична щільність дослідної та еталонної проб,
3,39 - перерахункових коефіцієнт.
Зіставити з нормою вмісту ТАГ в сироватки крові у здорових людей і зробити висновок.
У нормі вміст ТАГ в сироватці крові становить 0,15-1,71ммоль / л або 0,5-1,5 г / л;
прикордонно-висока тріацілгліцерінемія - 1,5-2,0 г / л (1,71-2,3 ммоль / л);
висока (виражена) гіпертригліцеринемія-2,0-5,0 г / л (2,3-5,6 ммоль / л);
дуже висока (важка) гіпертригліцеринемія 5,0 г / л (> 5,6 ммоль / л).
Клініко-діагностичне значення визначення ТАГ в сироватки крові. Найбільше значення має визначення зміст ТАГ в крові для встановлення типу дислипопротеинемий. Підвищення змісту ТАГ в крові (гіпертріацілгліцерінемія) відзначається при гиперлипопротеинемии I, II б, III, IV і V типів, вагітності, ожирінні, вірусному гепатиті, гіпертонічної хвороби, ішемічної хвороби серця, геморагічної лихоманки, нефротичному синдромі, алкоголізмі, жировій інфільтрації печінки, алкогольному і біліарному цирозі печінки, панкреатиті, глікогенозах I, III і VI типів, цукровому діабеті, гіпотиреозі та ін.
Зниження вмісту ТАГ в крові (гіпотріацілгліцерінемія) може бути виявлено при гіпо- та абеталіпопротеінеміі, хронічної обструктивної хвороби легень, інфаркті мозку, гіпертиреозі, лактозуріі, недостатності харчування, синдромі мальабсорбції, термінальній стадії поразки паренхіми печінки.
Робота № 1. Кількісне визначення активності ліпази в панкреатическом соку. | Еталони відповідей на ситуаційні задачі
Еталони відповідей на ситуаційні задачі | Заняття № 2. Тканинне окислення глюкози. Глюконеогенез (семінар). | Методичні вказівки до самопідготовки | Приклади тестів контролю вихідного рівня знань | Еталони відповідей на ситуаційні задачі | Методичні вказівки до самопідготовки | Приклади тест-контролю | Заняття № 1. Будова, біологічна роль та обмін нейтрального жиру (тригліцеридів). | Методичні вказівки до самопідготовки | Приклади тестів контролю вихідного рівня знань |