Головна

За Вольгемуту.

Амілаза - фермент, який здійснює гідролітичні розщеплення полісахаридів до декстринів і мальтози (хімізм реакції див. Занятіе№6). Кінцеві продукти дії амілази не дають кольорової реакції з йодом. Найбільш багаті амилазой слинні і підшлункова залози.

Клініко-діагностичне значеннямає визначення активності амілази в крові, куди вона потрапляє з підшлункової залози (40%) і слинних залоз (60%). Амілазна активність крові по Вольгемуту в нормі становить 25-125 Од / л. При гострому панкреатиті в першу добу захворювання активність амілази крові зростає в десятки разів, а потім поступово повертається до норми. Амілазна активність крові збільшується також при паротиті (запаленні слинних залоз). Амілаза має невелику молекулярну масу - 45 000, тому легко проходить нирковий фільтр і потрапляє в сечу. У зв'язку з меншою інвазивністю визначення амілазной активності сечі (диастазное тест) широко використовується в клініці для діагностики стану підшлункової залози (див. УИРС).

Принцип методу. Метод заснований на тому, що слину розводять в певній послідовності, після чого доливають одне і теж кількість розчину крохмалю і знаходять найменше зміст ферменту, яке повністю розщеплює всі кількість доданого крохмалю. Потім проводять перерахунок активності ферменту на 1 мл слини.

Амілазна активність слини або амілокластічекая сила слини виражається кількістю 0,1% розчину крохмалю в мл, яке може розщеплюватися 1 мл слини при температурі 380 протягом 30 хв.

У нормі амілазна активність слини становить 160-320 од.

Хід роботи. У 10 пронумерованих пробірок наливають по 1 мл води. Потім в першу пробірку додають 1 мл слини, розведеної в 10 разів. Вміст першої пробірки перемішують і 1 мл розчину (сумарна розведення в 20 разів) переносять з 1-й пробірки у другу, перемішують (рслюна розлучена в 40 разів). Потім 1 мл розведеної слини з другої переносять в третю і. т. д. - з попередньої пробірки в наступну. З 10 пробірки 1 мл суміші виливають. Таким чином, виходить ряд розведеною слини, в якому в кожній наступній пробірки зміст ферменту вдвічі менше, ніж у попередній.

У всі пробірки додають по 1 мл води і по 2 мл 0,1% розчину крохмалю, перемішують і поміщають пробірки в термостат на 30 хв при температурі 380.

Через 30 хвилин пробірки виймають, охолоджують, додають по 1-2 краплі 1% розчину йоду і перемішують. Рідина в пробірках в залежності від ступеня розщеплення крохмалю може фарбуватися в жовтий, рожевий, червоний і фіолетовий колір. Розчин жовтого кольору свідчить про повну розщепленні крохмалю, фіолетовий - про те, що крохмаль в розчині ще зберігся.

Роботу необхідно оформити у вигляді таблиці.

 Розведення слини  № пробірки
 К-во0,1% крохмалю                    
 Окрашіваніейодом                    
 Амілокластіческая активність слини                    
                       

Розрахунок. Береться кількість слини в останній пробірці з жовтим забарвленням. Якщо це четверта пробірка, то розведення слини в ній - 160 разів. Складається пропорція: 1). 160 мл слини розщеплює 2 мл 0,1% розчину крохмалю; 2) 1 мл слини розщеплює Х мл 0,1% розчину крохмалю, т. Е. Амілокластіческая активність слини становить 320 од.



Приклади тестів контролю вихідного рівня знань | Робота № 2. Фотоколориметричний метод дослідження активності лактатдегідрогенази в сироватці крові по Севели і Товареку.

Робота № 3. Термолабильность ферментів. | Робота № 4. Вплив реакції середовища (оптимум рН) на дію ферментів слини. | Методичні вказівки до самопідготовки | Приклади тестів контролю вихідного рівня знань | Приклади ситуаційних завдань | Самостійна робота студентів | Малонової кислотою. | Еталони відповідей на ситуаційні задачі | Методичні вказівки до самопідготовки | Основи імуноферментного аналізу |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати