Головна

Брандберга-Робертса-Стольнікова.

Клініко-діагностичне значення.У нормі сеча не містить білка в кількості, що виявляється звичайними хімічними методами. Білок в сечі з'являється при захворюваннях нирок, при порушенні білкового складу крові.

Принцип методу. В основі методу лежить проба Геллера - денатурація білка азотною кислотою. Експериментально встановлено, що при нашарування на азотну кислоту, розчини, які містять 0,0033% білка, дають біле колечко в проміжку між другою і третьою хвилинами після нашарування. Якщо колечко з'являється безпосередньо після нашарування розчину білка на азотну кислоту, то шляхом послідовного розведення досліджуваного матеріалу досягають такого максимального розведення, при якому з'являється кільце між другою і третьою хвилинами. Помноживши розведення на 0,0033%, виходить процентний вміст білка в сечі.

Хід роботи.Приготувати 2 ряди пробірок (по 8 у кожному). У всі пробірки першого ряду долити по 1 мл концентрованої азотної кислоти.

У пробірках другого ряду розвести досліджувану сечу методом кратних розведень. Для цього в першу пробірку і другу пробірки цього ряду налити по 1 мл досліджуваної сечі, у другу і всі наступні - по 1 мл дистильованої води.

Після перемішування з другої пробірки перенести 1 мл рідини в третю, потім після перемішування такий же обсяг з третьої пробірки перенести в четверту і т.д. до кінця ряду. З останньої пробірки 1 мл рідини вилити. Таким чином, виходить наступний ряд розведень досліджуваної сечі: в першій пробірці сеча вихідної концентрації, в 2-ій - розлучена в 2 рази, в 3-ій - в 4 рази, в 4-ій - в 8 раз, в 5-ій - в 16, в 6-ий - в 32, в 7-ий - в 64, в 8-ий - в 128.

Після розведення сечі зробити почергове нашарування вмісту кожної пробірки на концентровану азотну кислоту. За секундоміром відзначити, в якій пробірці біле кільце утворилося через 2-3 хвилини після початку досліду.

Приблизний розрахунок. Між 2-ий і 3-ій хвилинами біле кільце утворилося в 5-ій пробірці, де розведення сечі 1:16.

Отже, концентрація білка в вихідної порції сечі дорівнює:

0,0033% ? 16 = 0,05%

УИРС.Якісне та кількісне дослідження сечі на вміст білка. Порівняння результатів кількісного визначення білка в сечі сульфосаліцилову методом і методом Брандберга-Робертса-Стольнікова.

1. Довести наявність білка в сечі за допомогою проб, заснованих на коагуляції білка хімічними реактивами: пробій Геллера (див. Вище) і за допомогою розчину сульфосалициловой кислоти (СРК).

Сульфосаліцилова проба. Умови досвіду. Сеча повинна бути кислою (рН5,0-6,5). Лужну сечу підкисляють 10% р-ром оцтової кислоти. Надлишок кислоти, як і лужна реакція, призводять до псевдонегативну пробі (пояснити механізм). До 2-3 мл сечі додають 4-6 крапель 20% розчину сульфосалициловой кислоти. При наявності білка сеча мутніє.

2. Сульфосаліциловий метод кількісного визначення білка в сечі. Хід роботи. В пробірку вносять 5 мл 3% розчину ССК і додають 1,25мл профільтрованою сечі, змішують. Через 5 хв колориметрируют при довжині хвилі 590-650 нм (помаранчевий або червоний світлофільтр) проти контролю в кюветі на 5 мм. Контроль містить 5 мл 0,9% розчину хлориду натрію. Інтенсивність помутніння при коагуляції білка ССК пропорційна його концентрації.

За калібрувальним графіком знаходять вміст білка в сечі.

3. Визначити вміст білка в тому ж матеріалі за допомогою методу Брандберга-Робертса-Стольнікова, як описано вище. Порівняти отримані результати. Зробити висновок.



Робота № 4. Осадження білків органічними кислотами. | Еталони відповідей на ситуаційні задачі

Амінокислоти, що надають білкам основний характер - | Робота № 1. Кількісне визначення білка сироватки крові біуретовим методом. | фотоелектроколориметр | УИРС. Дослідження деяких особливостей амінокислотного складу яєчного, соєвого білків і желатину. | Еталони відповідей на ситуаційні задачі | Заняття № 2. Фізико-хімічні властивості білків. | Методичні вказівки до самопідготовки | Приклади тестів контролю вихідного рівня знань | Робота № 1. Висолювання білків сироватки крові сірчанокислим амонієм. | Робота № 2. Осадження білків при кип'ятінні. |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати