Головна

АНАЛІЗ гетерогенних КУЛЬТУРИ КЛІТИН ПРИ РЕЄСТРАЦІЇ ЗМІНИ градієнт біохімічних КОМПОНЕНТІВ КЛІТИН

  1. Соціальні зміни (теорії, моделі, фактори).
  2. Cперматогенез. Збільшення продукції тестостерону запускає в яєчках освіту зрілих чоловічих статевих клітин - сперматозоїдів.
  3. Dasein-аналіз Л. Бінсвангера. Структура існування: буття-в-світі, буття-за-межами-світу.
  4. DSM-IV і облік впливу культури
  5. I. Аналіз демографічної ситуації в Концепція РФ
  6. I. Аналіз діяльності школярів
  7. I.1 Розрахунок w (X) при заданій масі (або обсязі) компонентів розчину

На прикладі галофільних мікроорганізмів розглядається можливість вивчення відмінностей клітин, які діляться гетерогенної і синхронної культур при реєстрації змін градієнта концентрації біохімічних компонентів нативних клітин за допомогою аналізу змін інтенсивності смуг поглинання, змін відносин інтенсивностей смуг поглинання і дихроїчних відносин.

Для вирішення ряду практичних завдань біотехнології використовуються синхронні культури мікроорганізмів.

В даному розділі пропонуються деякі підходи порівняння синхронної і несинхронної культур на прикладі галофільних мікроорганізмів.

У роботі був використаний метод НПВО в інфрачервоному діапазоні. Цей діапазон широко використовується в біотехнологічних дослідженнях процесів культивування.

Для отримання синхронної культури добову культуру НаlоЬасtrium halobium вирощували за методикою. За показник однорідності клітин в культурі був прийнятий розмір клітин. Центрифугуванням на проточній центрифузі С-44 вдавалося отримати інокулят з клітинами одного розміру. Отриманий біологічний матеріал вирощували в колбах на качалці при температурі 38оС. нализ проб проводили кожну годину після початку експерименту і продовжували 8-10 год.

Застосований метод НПВО для порівняння синхронної і несинхронної культур дозволяє отримати інформацію про наявність біохімічних компонентів, ідентифікованих за їх характеристичним смугах поглинання як в цілій клітині, так і в заздалегідь визначеному шарі клітини.

Істотні відмінності синхронної і несинхронної культур галлофілов на спектрах виявляються в області поглинання 1430-1480 см -1. У літературі немає чіткої ідентифікації цих смуг поглинання для спектрів цілих клітин, тому питання їх інтерпретації підлягає ще вирішенню. З нашої точки зору, знайдені відмінності в цій області для практичних цілей представляють інтерес тим, що вона найбільш лабільна в часі. Це дає підставу для її використання при вивченні дії зовнішніх чинників на культури як способу отримання інформації про їхній стан. Саме в цій області найбільш яскраво проявляється реакція клітин багатьох інших культур на вплив. Для ділиться синхронної культури галофили відмінності спектрів від гетерогенної того ж віку найбільш помітні. Це наводить на думку про використання процесу поділу клітин синхронних культур як способу отримання інформації про хід технологічних процесів.

Відмінності синхронної і несинхронної культур виявлені і при розрахунку співвідношення смуг поглинання 1660 і 1550 см -1 , Отриманих для перпендикулярної складової плоскополяризованого світла. У табл. 2.1 наведені розрахункові дані для трьох періодів розвитку культури. Періоди визначені при підрахунку клітин в камері Горяєва. З таблиці видно, що співвідношення зазначених смуг для синхронної і несинхронної культур значно відрізняється також в період поділу.


Мал. 2.1. Спектральні характеристики синхронної культури:

1 - спектр з глибини ~ 0,2 мкм,

2 - спектр з цілих нативних клітин

На рис. 2.1 представлені спектри НПВО незруйнованих клітин і "зрізів" цих же клітин з глибини 0,2 мкм. Звертає на себе увагу відмінність в спектрах в областях 1240 см -1 (в сновном приписується нуклеїнових кислот) і 1740 см -1 (Приписується ліпідів). Так в спектрі "зрізу" клітин смуга 1240 см -1 практично відсутня, а в цілих клітинах вона інтенсивна. Смуга ж 1740 см -1 значно інтенсивніше для "зрізу" клітин і менш інтенсивна для спектра цілих клітин. Ці дані узгоджуються з біохімічними аналізами практично для будь-яких мікроорганізмів. Таким чином, якщо вибрати глибину проникнення світлового потоку в так звану середню за розмірами клітку приблизно між серединою цієї клітини і клітинної стінкою, то відхилення інтенсивності поглинання в області 1240 см -1 від інтенсивності цієї смуги для "середньої" клітини має характеризувати зміна гетерогенності, зокрема, за розмірами. Справедливість цього припущення перевіряли при порівнянні синхронної і несинхронної культур. За синхронної культурі підбирали параметри вимірювального елемента такими, щоб смуга 1240 см -1 не спостерігалося. В спектрі несинхронної культури того ж віку чітко видна смуга, інтенсивність якої в процесі росту і розвитку може змінюватися і в зв'язку зі зміною розмірів клітин. Поява цієї смуги спостерігали і при рассинхронизации культури, т. Е. При збільшенні її гетерогенності. Проведений підрахунок клітин в культурі підтвердив появу несинхронного ділення клітин. Регулюючи глибину проникнення світлового потоку можна, ймовірно, вивчати і гетерогенність культури, пов'язану з нестабільністю просторового положення біополімерів в клітці. Вимірюючи зміну співвідношення смуг поглинання (наприклад, амід 1 і амід 2), також можна отримати уявлення про біохімічної гетерогенності культури в процесі розвитку.

Таблиця 2.1


Зупинимося ще на одній можливості аналізу. У табл. 2.1 представлені середні з п'яти вимірювань дані розрахунків дихроїчних відносин спектрів з різних глибин проникнення світла для синхронної і несинхронної культур. Раніше було показано, що клітинам властива певна ступінь впорядкованості знаходяться в них біополімерів, яка зникає для шару, що зачіпає лише клітинну стінку і мембрану, що, можна вважати, є наслідком прихованої анізотропії. Результати, представлені в даному розділі, для несинхронної культури практично збігаються зі сказаним вище, а для синхронної - значно відрізняються: для синхронної культури анізотропія спостерігається навіть в тих областях поглинання, де вона не виявлена ??для несинхронної. Цей факт підтверджує припущення про наявність прихованої анізотропії, яка, можливо, є також наслідком гетерогенності несинхронної культури клітин. Найбільш суттєві відмінності і в цьому випадку спостерігаються під час ділення клітин синхронної культури. У разі невідповідності культури величини дихроїчних відносин практично стали збігатися з величинами, що характеризують несинхронно культуру.

Отримані результати дають підставу припустити, що зміни, що відбуваються в клітинах в період ділення, можна використовувати для отримання інформації при вивченні популяцій, в тому числі і про рівень "організованості" різних культур клітин в процесі розвитку. Крім того, є перспективним використання синхронних культур клітин в якості одного з "інструментів" дослідження поведінки популяцій мікроорганізмів при зміні зовнішнього середовища.

ХАРАКТЕРИСТИКА КРІПТОБІОТІЧЕСКОГО СТАНУ СПОР ПРИ РЕЄСТРАЦІЇ ЗМІНИ градієнт СТУПЕНЯ ПРОСТОРОВОЇ ОРГАНІЗАЦІЇ біохімічних КОМПОНЕНТІВ ІНТАКТНИХ КЛІТИН | ДОСЛІДЖЕННЯ ДИНАМІКИ НАДХОДЖЕННЯ І УТИЛІЗАЦІЇ вуглеводнів в клітини мікобактерій, ПРИ РЕЄСТРАЦІЇ ЗМІНИ градієнт ХІМІЧНИХ КОМПОНЕНТІВ


ДОСЛІДЖЕННЯ взаємозв'язку В ЗМІНИ СТРУКТУР І ФУНКЦІЙ ІНТАКТНИХ КЛІТИН | ВИКОРИСТАННЯ фагів у дослідженні "СТАНУ" БАКТЕРІЙ | Визначення кількості ВОДИ У ІНТАКТНИХ КЛІТИНАХ ПРИ РЕЄСТРАЦІЇ ЗМІНИ градієнт ПОЛОЖЕННЯ ПІДСТАВИ СМУГ ПОГЛИНАННЯ | ВИЯВЛЕННЯ ОСОБЛИВОСТЕЙ КУЛЬТУРИ МІКРООРГАНІЗМІВ В ПРОЦЕСІ ЇЇ РОЗВИТКУ ПРИ РЕЄСТРАЦІЇ КОМПЛЕКСУ ХАРАКТЕРИСТИК |

© 2016-2022  um.co.ua - учбові матеріали та реферати