Головна

переваги методу | Основний принцип хроматографічного розділення. | Пристрій рідинного хроматографа | Інжектори | Детектори для ВЕРХ | колонки | Методики виконання лабораторних робіт | Метод РН диференціальної спектрофотометрії визначення масової частки суми антоцианінів в сокової продукції. | Спектрофотометрическое визначення кількісного вмісту аскорбінової кислоти (вітаміну С) в напоях. | Визначення вмісту вітамінів В1, В2 методом ВЕРХ у премікси. |

проведення випробування

  1. II. Проведення першого етапу
  2. III. Проведення другого етапу
  3. III. проведення уроку
  4. VI. Організація і проведення конкурсу
  5. Питання 26: Проведення досліджень стійкості функціонування об'єкта при НС мирного і воєнного часу
  6. Питання 28 Склад документів, які містять вимог до контролю і випробувань.
  7. Питання. Законодавча база, яка регулює проведення валютних операцій в Росії.

Мета заняття: ознайомлення з іонообмінним методом ВЕРХ визначення кількісного вмісту і складу вуглеводів в медах з використанням методу зовнішнього стандарту або абсолютної калібрування

Суть методу.

Суть методу полягає в добуванні вуглеводів з навішування меду водою і визначенні їх складу і кількісного вмісту на рідинному хроматографе з рефрактометрическим детектором методом ионообменного елюювання з використанням каліброваного графіка стандартів.


 Матеріали та обладнання.

1. Хроматограф рідинної з насосом Waters один тисяча п'ятсот двадцять п'ять EF і рефрактометрическим детектором Waters 2414 з діапазоном вимірювання за коефіцієнтом рефракції 1-1,75 RIU

2. Колонка хроматографічна сталева Sugar -Pak, розміром 6.5 ? 300 мм, наповнена мікрокристалічним Катіонообменная гелем в кальцієвої формі.

3. Установка ультразвукова з частотою ультразвуку 43-45 кГц.

4. Ваги лабораторні за ГОСТ 24104 з межами абсолютної похибки однократного зважування ± 0,1 мг.

5. Фільтри з розміром пір 0,45 мкм, діаметром 13 мм.

6. Елюент 0,0001 М розчин кальцію ЕДТА (кальцієва сіль етілендіамінотетрауксусной кислоти), приготований на воді з питомим опором 2 мега Ом * см.

7. Глюкоза кристалічний гідрат, х.ч. по Гост 975-88.

8. Фруктоза кристалічна, х.ч.імп.

9. Вода деіонізованной з питомим опором 2 мега Ом * см.

Побудова градуювальних графіків для стандартів глюкози і фруктози.

(1,0+0,0005) г стандартного зразка препарату глюкози розчиняють в деионизованной воді в колбі місткістю 100 мл, доводять цим же розчинником до мітки і перемішують. Отримують основний стандартний розчин глюкози з вмістом 10 мг / мл.

З цього розчину готують градуювальні (робочі) розчини, що містять 1 мг; 5 мг; 10мг; 15мг; 20 мг глюкози в 100 мл відповідно. Для цього беруть відповідно 0,1; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 мл основного розчину, поміщають в мірні колби місткістю 100 мл, доводять до мітки деионизованной водою і перемішують.

Аналогічним чином готують робочі стандартні розчини для препарату фруктози.

Розчини придатні в день приготування.

Робочі стандартні розчини аналізують на рідинному хроматографе за таких умов:

- Хроматографічна колонка сталева Sugar-Pak, розміром 6,5 ? 300 мм, наповнена мікрокристалічним Катіонообменная гелем в кальцієвої формі;

- Рухома фаза 0,0001 М розчин кальцію ЕДТА (кальцієва сіль етілендіамінотетрауксусной кислоти), приготований на воді з питомим опором 2 мега Ом * см;

- Обсяг проби 20 мкл;

- Швидкість подачі елюента 0,5 мл / хв;

- Температура хроматографічної колонки 80 ° С;

- Температура детектора 50 ° С;

Час виходу хроматографічного піку глюкози становить 9,5 хв, фруктози 11,4 хв.

Кожен розчин хроматографіруют по 2 рази і будують калібрувальні графіки для глюкози і фруктози відповідно, відкладаючи по осі ординат значення площ хроматографических піків, по осі абсцис - значення вмісту глюкози або фруктози в мг в 100 мл розчину.

Перевірка градуювальних графіків.

Градуювальні графіки контролюють не рідше 1 разу на тиждень. Для цього 1-2 робочих розчину стандартів глюкози і фруктози хроматографіруют при вище зазначених умовах. Відхилення отриманих результатів (площа хроматографических піків) від виміряних в момент побудови градуювального графіка, А%, визначають за формулою (1)

 (1)

де, S1 і S2 -площа хроматографических піків, певні при побудові градуювального графіка і в момент перевірки відповідно.

При відхиленні результатів більш, ніж на 5%, будують новий градуйований графік по свіжоприготовленим розчинів препарату глюкози і фруктози.

проведення аналізу

Наважку меду масою 1 г, зважену з похибкою не більше 0,0005 г, поміщають в стаканчик місткістю 100 мл, доливають 50 мл деионизованной води і перемішують до повного розчинення. Потім розчин кількісно переносять в мірну колбу місткістю 100 мл, доводять цим же розчинником до мітки і перемішують.

1 мл отриманого розчину поміщають в мірну колбу місткістю 100 мл, доводять до мітки деионизованной водою і перемішують. Отриманий розчин фільтрують через фільтр з розміром пор 0,45 мкм і використовують для хроматографування.

Підготовку проб проводять в двох паралелях.

хроматографирования

Отримані випробовувані розчини хроматографіруют по 2 рази. На хроматограмах випробовуваних розчинів знаходять площі хроматографічних піків цукрів глюкози і фруктози, розраховують середнє значення площ і по градуіровочномим графіками визначають зміст відповідних цукрів в 100 мл в мг.

Хроматографирования випробовуваних розчинів здійснюють в тих же умовах, що і стандартні розчини, при побудові калібрувальних графіків.

Обробка результатів випробування.

Вміст цукрів глюкози (Х1) І фруктози (Х2) В досліджуваних зразках в мг / г визначають за формулою (2):

;  (2)

Де, З1 (З2) -Зміст Цукрів глюкози і фруктози в 100 мл, знайдене по калібрувальним графіками, в мг відповідно ,;

m- маса навішення меду, г;

100- розведення

Результат визначення обчислюють з точністю до першого десяткового знака і округлюють до цілого числа.

За остаточний результат приймають середнє арифметичне результатів двох паралельних визначень, допустиме розходження між якими при довірчій ймовірності Р = 0,95 не повинно бути більше 10% відносно середнього арифметичного значення.

Список рекомендованої літератури

1. ФСП 42-0119-0445 00 Пиридоксин розчин для ін'єкцій 50 мг / мл.

2. ГОСТ Р 53773-2010 Продукція сокова. Методи визначення антоцианінів.

3. Керівництво по методах контролю якості та безпеки біологічно активних добавок до їжі Р 4.1.1672-03.

4. Методика копанні Waters з розділення моносахаров методом іонообмінної хроматографії за допомогою колонки Waters Sugar-Pak I.

5. Гост Р 50929-96 Пріемікси. Методи визначення вітамінів групи В.

6. Нолтінг Б. Новітні методи дослідження біосистем. Світ біології та медицини. Переклад з анг. Хромова-Борисова Н. Н.. М. Техносфера. 2005р 254 с.

7. Стискін Е. Л., Іціксон Е. Б., Брауде Е. Б. Практична високоефективна рідинна хроматографія, М., 1988 р-284 с.

8. Вільсон К., Уолкер Дж. Принципи та методи біохімії і молекулярної біології. Пер. з англ. -М; Біном. Лабораторія знань, 2013.-848 с. : Ил., [4] с. кол. Увімкнути. - (Методи в біології).



Основи ионообменного методу | Вступ.
© um.co.ua - учбові матеріали та реферати