Головна

Сучасні методи дослідження біологічно активних речовин | Спектральні методи аналізу | переваги методу | Основний принцип хроматографічного розділення. | Пристрій рідинного хроматографа | Інжектори | Детектори для ВЕРХ | колонки | Методики виконання лабораторних робіт | Метод РН диференціальної спектрофотометрії визначення масової частки суми антоцианінів в сокової продукції. |

Визначення вмісту вітамінів В1, В2 методом ВЕРХ у премікси.

  1. I. 4. Які типи хвиль існують в природі, техніці? Які хвилі називаються пружними? Дайте визначення поздовжніх і поперечних пружних хвиль.
  2. I. 9. Опишіть пристрій лабораторної установки по визначенню швидкості звуку методом резонансу.
  3. I. Визначення рівнянь лінійної регресії
  4. I. ПОСТАНОВКА ПРОБЛЕМИ І ВИЗНАЧЕННЯ МОВНИХ ЖАНРІВ 1 сторінка
  5. I. ПОСТАНОВКА ПРОБЛЕМИ І ВИЗНАЧЕННЯ МОВНИХ ЖАНРІВ 2 сторінка
  6. I. ПОСТАНОВКА ПРОБЛЕМИ І ВИЗНАЧЕННЯ МОВНИХ ЖАНРІВ 3 сторінка
  7. I. ПОСТАНОВКА ПРОБЛЕМИ І ВИЗНАЧЕННЯ МОВНИХ ЖАНРІВ 4 сторінка

Мета заняття: ознайомлення з методом високоефективної рідинної хроматографії і визначенні кількісного вмісту вітамінів В1, В2 в преміксах.

Матеріали та обладнання

1. Рідинної хроматограф з насосом Waters один тисяча п'ятсот двадцять п'ять EF і спектрометричним детектором Waters 2487

2. Хроматографічна колонці Symmetry 300тм C 18. 5 мкм, 3,9 ? 150 мм.

3. Ваги лабораторні за ГОСТ 24104 з межами абсолютної похибки однократного зважування ± 0,1 мг.

4. Установка ультразвукова з частотою ультразвуку 43-45 кГц.

5. Центрифуга RotoFix 32A

5. Основною стандартний розчин вітаміну В1 з концентрацією 1 мг / мл.

6. Основною стандартний розчин вітаміну В2 з концентрацією 0,05 мг / мл.

7. Розчин хлористоводневої кислоти молярної концентрації 0,01 моль / мл.

8. Одноразові фільтри з розміром пор 0,45 мкм діаметром 13 мм.

Приготування розчинухлористоводородной кислоти з концентрацією 0,01моль / мл.

До 1 л дистильованої води додають 0,8 мл концентрованої (37%) хлористоводородной кислоти і доводять рН розчину до 2+0,2.

Приготування робочого стандартного розчину

вітамінів В1 і В2

Для приготування основних стандартних розчинів вітамінів В1 і В2 6еpyт навішування 0,1 г тіаміну хлориду і 0,01 г рибофлавіну. Наважку тіаміну хлориду розчиняють в дистильованої воді мірній колбі місткістю | 100 мл, а рибофлавіну в мірній колбі місткістю 200 мл, при нагріванні до температури 70-80 "С і доводять дистильованою водою до мітки. Отримані розчини містять в 1 мл 1 мг вітаміну В1 і 0,05 мг вітаміну В2 відповідно.

Термін зберігання основних стандартних розчинів вітамінів В1 і В2 - не більше 2 тижнів в холодильнику.

Контроль за вмістом вітамінів В1 і В2 в основних стандартних розчинах

Контроль за вмістом вітамінів в основних стандартних розчинах здійснюють спектрофотометрически за значеннями молярних коефіцієнтів світлопоглинання.

Для цього основні стандартні розчини розбавляють дистильованою водою в 50 разів і вимірюють оптичну щільність розчинів на спектрофотометрі в кюветі товщиною поглинаючого світло шару I см.

Масову концентрацію вітамінів В1 і В2 (С) розраховують за формулою (1)

,  (1)

де D - оптична щільність;

Е молярний коефіцієнт;

l- товщина шару розчину, 1. см.

Масову концентрацію вітамінів В1 (С1) і В2 (С2), мг / мл, розраховують відповідно за формулами (2) і (3):

 (2)
 (3)

Де, 205- молярний коефіцієнт світлопоглинання тіаміну хлориду при робочій довжині хвилі 268 нм;

324- молярний коефіцієнт світлопоглинання рибофлавіну при робочій довжині хвилі 445 нм;

Приготування робочого стандартного розчину вітамінів

В1 і В2

З основних стандартних розчинів готують робочі стандартні розчини з вмістом вітамінів В1 - 0,02 мг і В2 - 0,025 мг в 1 мл.

Для цього в мірну колбу місткістю 50 см 'поміщають 1 мл основною стандартного розчину тіаміну хлориду і 25 мл основного стандартного розчину рибофлавіну, доводять до мітки дистильованою водою і перемішують.

Робочий стандартний розчин готують в день випробувань.

П р о в е д е і і е і з п и т а й і я

Екстракція вітамінів В1, і В2,

Наважку преміксу масою 1 г, зважену з похибкою не більше 0,0005 р поміщають в конічну колбу з шліфом місткістю 100 мл і доливають 10 мл розчину соляної кислоти молярної концентрації с (НСІ) - 0,01 моль / мл. Колбу ставлять на магнітну мішалку з включенням нагрева80 ° С. Перемішування і нагрівання здійснюють протягом 10 хв. Отриману суспензію переливають в центрифужную пробірку і центрифугують при 5000- 6000 об / хв протягом 3 хв. Центрифугат зливають в мірну колбу місткістю 25 мл. Конічну колбу з залишком розчину змивають невеликою кількістю (близько 5 мл) розчинухлористоводородной кислоти молярної концентрації 0,01 моль / мл, зливають розчин в центрифужную пробірку і знову центрифугують, Центрифугат з'єднують з першим в тій же мірній колбі. Промивання центрифугуванням повторюють 3-4 рази, кожен раз зливаючи промивні води в ту ж колбу. Після цього розчин в мірній колбі доводять дистильованою водою до мітки і перемішують. Отриманий розчин фільтрують через фільтр з розміром пор 0,45 мкм і використовують для хроматографічного аналізу.

Хроматографирования.

Хроматографирования здійснюють в наступних умовах:

- Поділ проводять на колонці Symmetry 300 C 18. 5 мкм, довжиною 3,9 мм * 150 мм.

- Рухома фаза - елюент, що складається з 120 мл ацетонітрилу, 800 мл води бидистиллята, 2,5 мл триетиламіну, 0,5 г октансульфоната натрію, рН розчину 7,6, доводиться ортофосфорної кислотою.

- Робоча довжина хвилі спектрофотометрического детектора хроматографа 254 нм.

- Швидкість елюювання 1,2 мл / хв

- Час | я елюювання для вітаміну В1 становить 2,5 хв, а для вітаміну В2 2,9 хв

- Обсяг завантаження аналізованого розчину 20 мкл.

Для насичення колонки на початку роботи проводиться 3-5 завантажень, відзначаючи площі піків. При досягненні постійної площі піку можна приступити до випробувань. Аналізовані розчини хроматографнруют кожен по три рази в однакових умовах. У цих же умовах хроматографіруют робочі стандартні розчини вітамінів В1 і В2.

Обробка р е з у л ь т а т о в і з п и т а н і я

Зміст вітамінів В1 і В2 Х1, і Х2 в премікс, мг / кг, обчислюють за формулою

 (4)

де S - площа піку вітаміну на хроматограмах екстракту з

преміксу;

с - масова концентрація вітаміну в робочому стандартному розчині, мг / мл;

V - об'єм преміксу з екстрактом, мл;

Sст - Площа піку вітаміну на хроматограмах робочого стандартного розчину;

m- маса навішення преміксу, м

Результат випробування обчислюють до першого десяткового знака округлюють до цілого числа.

За остаточний результат приймають середнє арифметичне результатів двох паралельних визначень, допустимі розбіжності між якими при довірчій ймовірності Р = 0,95 не повинні бути більше 10% відносно середнього арифметичного значення, а між результатами, виконаними в двох різних лабораторіях при довірчій ймовірності Р = 0, 95 не повинні бути більше 15%

 



Спектрофотометрическое визначення кількісного вмісту аскорбінової кислоти (вітаміну С) в напоях. | Основи ионообменного методу
© um.co.ua - учбові матеріали та реферати