На головну

Вплив реакції середовища на активність амілази.

  1. I. ОСНОВИ ДОСЛІДЖЕННЯ мікросередовища
  2. III. Вплив нафти і газу на історію людства.
  3. III. Організація предметно-ігрового середовища
  4. III. Організація предметно-ігрового середовища
  5. IV. Позиція в колективі, соціальна активність
  6. А) Коли температура поверхні тіла вирівнюється з такою навколишнього середовища, провідне значення набуває потовиділення і випаровування поту та вологи з поверхні тіла.
  7. активність

Принцип методу.Каталітична активність ферментів залежить від рН середовища. Зі зміною величини рН змінюється структура ферменту. Для кожного ферменту характерний певний оптимум рН. Від рН залежить ступінь іонізації ферменту.

 
 

 Залежність ферментативної активності від рН середовища вивчається в роботі на прикладі ?- ??амілази, субстратом якої є крохмаль (полісахарид, що складається з глюкози). Фермент ?- амілаза (?-1,4-глюкан-4-глюканогідролаза) міститься в слині і каталізує гідроліз ?- глюказідной зв'язку ?-1,4-крохмалю і глікогену до дисахарида мальтози. Крім того, в слині є Фермент мальтаза, що розщеплює мальтозу до глюкози.

 
 


крохмаль декстрини мальтоза

Гідроліз крохмалю під дією ?- амілази проходить до стадії освіти декстринів. Нерозщеплений крохмаль з йодом дає синє забарвлення, декстрини в залежності від розміру дають з йодом забарвлення: амілодекстріни - фіолетове, еритродекстрини - червоно-буре, ахродекстріни і мальтоза - жовте (колір йоду у воді, т. Е. Фарбування з йодом не дають). Кінцеві продукти гідролізу крохмалю - мальтоза і глюкоза - мають вільні альдегідні групи і можуть бути виявлені реакцією Троммера, в основі якої лежить окисно-відновна реакція. При цьому альдегидная група окислюється до глюконової кислоти, а мідь - гідрат окису міді (блакитного кольору) відновлюється в гідрат закису міді жовтого кольору. При подальшому нагріванні гідрат закису міді переходить в червону закис міді.

 
 

реактиви: амілаза слини (полощуть рот, потім набирають 10-15 мл дистильованої води і тримають її в роті протягом хвилини, після чого зливають в стаканчик); крохмаль, 0,1% розчин на 0,3% розчині хлориду натрію; розчин Люголя; їдкий натр, 0,1 Н розчин; HCl, 0,1 Н розчин.

Хід роботи: Активність амілази слини неоднакова у різних людей і навіть змінюється протягом дня у одного і того ж людини. Тому необхідно підібрати відповідне розведення розчину слини так, щоб гідроліз 1 мл розчину крохмалю при кімнатній температурі і нейтральної реакції середовища під впливом 1 мл розчину слини проходив на 5-8 хвилин. Для цього в пробірці змішують 1 мл розчину крохмалю і 1 мл розчину слини. Відразу ж після змішування краплю суміші завадять в чисту пробірку, додають краплю розчину Люголя і відзначають забарвлення. Надалі проби беруть з інтервалом в півхвилини. Реакція вважається закінченою, коли колір розчину Люголя не змінюється. Якщо гідроліз крохмалю відбувається швидко, то слину розводять і знову визначають час розщеплення крохмалю. Якщо гідроліз крохмалю йде повільніше, ніж 10 хвилин, то до розчину ферменту додають кілька крапель нерозведеної слини і визначають час повного гідролізу крохмалю. Після підбору потрібної активності ферменту виконують основну частину роботи з вивчення впливу реакції середовища на активність амілази.

Схему побудови досвіду і отримання результатів записують в таблицю:

 проби  НС10,1н; мл  NaOH 0,1 н; мл H2Oмл  рН  Крахмалмл  фермент мл  реакція з йодом
 0,5 -  1,5  кисла  
- -  2,0  нейтральна 6,9-7,0  
-  0,5  1,5  лужна  

Так як оптимум рН для амілази слини дорівнює 6,9 -7,0, спостереження за гідролізом крохмалю ведуть по пробі № 2 і додають розчин Люголя. Як тільки гідроліз у другій пробі закінчиться, досвід припиняють додаванням в усі три проби 2-3 краплі розчину Люголя.

Пробу № 3 перед додаванням розчину Люголя нейтралізують 0,1 н розчином соляної кислоти, так як в лужному середовищі реакція з йодом не йде.

Спостерігають відсутність реакції з йодом в другій пробі і фіксують відтінок в першій і третій пробах. Результати записують у таблицю, роблять висновки про вплив реакції середовища на активність амілази.

 



Теоретична частина. | Специфічність дії ферментів.

Радіальна (розподільча) рідинна хроматографія | Формоловая титрування. | Теоретична частина. | Осадження білків при кип'ятінні. | Реакції осадження білків при кімнатній температурі нейтральними солями - висолювання. | Діаліз білка. | Осадження білків солями важких металів. | Осадження білків алкалоїдними реактивами. | Теоретична частина. | Якісні реакції на відкриття складових частин нуклеопротеїдів. |

© um.co.ua - учбові матеріали та реферати