загрузка...
загрузка...
На головну

Культивування і індикація вірусів.

  1. Биоиндикация забруднень
  2. Питання: Морфологія вірусів.
  3. Класифікація комп'ютерних вірусів.
  4. Культивування вірусів на тканинних культурах.
  5. Заходи щодо захисту від вірусів.
  6. Пошук вірусів.

Культивування вірусів людини і тварин проводять з метою лабораторної діагностики вірусних інфекцій, для вивчення питань патогенезу і імунітету, отримання діагностичних і вакцинних препаратів, в науково-дослідній роботі.

Оскільки віруси є абсолютними паразитами, то їх культивують або на рівні організму, або на рівні живих клітин, вирощуваних поза організмом в штучних умовах. Як біологічних моделей для культивування використовуються лабораторні ембріони і культури клітин.

лабораторні тварини (Білі миші, бавовняні пацюки, кролики, хом'яки, мавпи) в початковий період розвитку вірусології були єдиною експериментальної біологічної моделлю, яку використовували для розмноження і вивчення властивостей вірусів. На підставі розвитку типових ознак захворювання і патоморфо-логічних змін органів тварин можна судити про репродукції вірусів, тобто проводити індикацію вірусів. В даний час використання цієї моделі для діагностики обмежена через несприйнятливості тварин до багатьох вірусів людини.

курячі ембріони запропоновані в якості експериментальної моделі для культивування вірусів в середині 30-х років Ф.Бернетом. До переваг моделі належить можливість накопичення вірусів в великих кількостях, стерильність об'єкта, відсутність прихованих вірусних інфекцій, простота техніки роботи. Для культивування вірусів досліджуваний матеріал вводять в різні порожнини і тканини курячого зародка (демонстрація табл. №).

Індикацію вірусів здійснюють за характером специфічних поразок оболонок і тіла ембріона, а також феномену гемаглютинації - склеювання еритроцитів. Явище гемаглютинації вперше було виявлено в 1941р. при культивуванні в курячих ембріонах вірусів грипу. Пізніше було встановлено, що гемагглютінірующімі властивостями володіють багато вірусів. На основі цього феномена була розроблена техніка реакції гемаглютинації (РГА) поза організмом, яка широко застосовується для лабораторної діагностики вірусних інфекцій. Курячі ембріони не є універсальною біомоделью для вірусів. Майже необмежені можливості з'явилися у вірусологів після відкриття методу вирощування культур клітин.

Метод культур клітин - Вирощування різних клітин і тканин поза організмом на штучних поживних середовищах - розроблений в 50-х роках Дж. Ендерсом. Переважна більшість вірусів здатне розмножуватися на культурах клітин. Для приготування культур клітин використовують найрізноманітніші тканини людини, тварин і птахів. Великого поширення набули культури клітин з ембріональних і пухлинних (злокачественно перероджуються) тканин, що володіють в порівнянні з нормальною тканиною дорослого організму більш активної здатністю до зростання і розмноження. Залежно від техніки виготовлення та культивування розрізняють 3 основні типи культур клітин і тканин:

1) одношарові культури клітин;

2) культури суспендованих клітин;

3) органні культури.

Найбільше практичне застосування отримали одношарові культури, що ростуть на поверхні скла лабораторного посуду у вигляді моношару клітин (рис. 3.4, а).

Одношарові культури клітин за кількістю життєздатних генерацій в свою чергу поділяють на первинні, або первічнотріпсінізірованние (здатні розмножуватися одноразово), перещеплюваних (здатні перевивали в лабораторних умовах протягом невизначено тривалого терміну) і полуперевіваемие (здатні розмножуватися протягом 40-50 пасажів).

Культури суспендованих клітин ростуть і розмножуються в підвішеному стані при постійному інтенсивному перемішуванні середовища. Вони можуть бути використані для накопичення великої кількості вірусів.

Деякі віруси краще розмножуються в органних культурах, які представляють собою шматочки органів тварини або людини, вирощуваних поза організмом і зберігають властиву даному органу структуру.

Залежно від властивостей вірусу підбирають найбільш чутливу до даного вірусу культуру клітин, на якій можлива його репродукція. Про розмноження вірусів в культурі клітин судять за такими ознаками:

O цитопатичної ефекту (ЦПЕ, ЦПД);

O утворення в клітинах включень;

O утворення бляшок;

O феномену гемадсорбції;

O «кольорової» реакції (кольоровий пробі).

ЦПЕ - Видимі під мікроскопом морфологічні зміни клітин, аж до їх загибелі (рис. 3.4, б). Характер ЦПЕ, викликаний різними вірусами, неоднаковий, наприклад розмноження вірусу поліомієліту супроводжується дегенерацією клітин, а віруси парагрипу репродукується в клітинних культурах, викликаючи злиття клітин з утворенням багатоядерних гігантських клітин-синцития.

включенняявляють собою скупчення вірусних частинок (тільця Пашена при натуральної віспи), вірусних білків або клітинного матеріалу, які можна обготівковув-ружить в ядрі або цитоплазмі клітин при спеціальних методах забарвлення (включення Бабеша-Негрі при сказі, включення Гварніері при натуральної віспи).

Бляшки або «негативні колонії» вірусів - Ділянки зруйнованих вірусами клітин - можна виявити при культивуванні вірусів на одношарових клітинних культурах, покритих тонким шаром агару (демонстрація табл. №) бентонітової покриття (демонстрація флакончиків з бляшками вірусу поліомієліту).

Бляшки, утворені різними вірусами, відрізняються за величиною, формі, часу появи, тому феномен бляшкоутворення використовують для диференціації вірусів.

реакція гемадсорбції - Здатність клітинних культур, заражених вірусом, адсорбувати на своїй поверхні еритроцити. Механізми реакцій гемадсорбції і гемаглютинації подібні. Багато віруси мають гемадсорбірующімі властивостями.

«Кольорова» реакція (проба) заснована на різниці в кольорі живильного середовища з індикатором, використовуваної для культур клітин. При зростанні клітин, що не уражених вірусом, відбувається накопичення продуктів метаболізму, що призводить до зміни кольору живильного середовища. При репродукції вірусів в культурі порушується нормальний метаболізм клітин, і середовище зберігає первісний колір (демонстрація ЦП).



Попередня   1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   Наступна

історичні дані | природа вірусів | Розміри вірусних частинок. | Морфологія. | Резистентність. | Види фагів, профаг, лізогенія. | профілактиці і терапії інфекційних захворювань. |

загрузка...
© um.co.ua - учбові матеріали та реферати